RNA指的是核糖核酸,。真核生物體的遺傳物質存在于細胞核內(nèi),,多數(shù)的真核生物使用DNA也就是脫氧核糖核酸來作為遺傳的中心物質,但是少量的病菌遺傳物質可以是RNA,。正因為病菌的遺傳物質是RNA,,所以可以通過檢測病菌的RNA是否存在,或者其濃度和含量來判斷是否存在相應的病菌傳染,,傳染的程度及病菌是否仍在大量復制,。一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構成,。RNA的堿基主要有4種,,即A腺嘌呤、G鳥嘌呤,、C胞嘧啶,、U尿嘧啶,,其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T,。RNA是核糖核酸的縮寫,。存在于生物細胞以及部分病菌,、類病菌中的遺傳信息載體,。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。專門的高鹽緩沖系統(tǒng)允許RNA物質基團結合到旋轉柱的玻璃纖維基質上,,同時使污染物通過柱被有效地洗去,。為了使這種酶對降解的影響較小化,較好在采集時就穩(wěn)定好樣本中的 RNA,。天津RNA提取試劑推薦廠家
拭子RNA提取試劑的選擇,?操作簡便性。操作簡便性也是拭子RNA提取試劑選擇的一個重要因素,。操作過于復雜,,不光費時費力,還容易導致樣本間的交叉污染,,也容易損失樣本,。特別是用于臨床檢測或樣本量較多情況下的檢測,操作復雜如果導致交叉污染會引起誤診,,還會影響出檢測報告的時間,。因而,選用操作簡便,、流暢的提取試劑盒非常重要,。就我們曾經(jīng)用過的以上三種提取試劑盒來說,Q公司的拭子RNA提取試劑盒提取過程大約25min,,從樣本處理開始需要10個步驟,;T公司拭子RNA提取試劑盒整個提取過程需要1個多小時,從樣本開始處理10個步驟,;B公司的Biog拭子RNA提取試劑盒提取過程大約20min,,從樣本開始處理7個步驟,B公司的拭子RNA提取試劑盒在操作簡便性上具有一定優(yōu)勢,,更適合于較多樣本的檢測,。據(jù)了解,該產(chǎn)品已通過藥監(jiān)局備案,,也更適合臨床樣本的檢測,。天津RNA提取試劑推薦廠家細胞質和細胞核RNA提取試劑盒特點:細胞質RNA不含DNA,直接用于RT-PCR/qRT-PCR,。
環(huán)狀RNA是一類產(chǎn)生于RNA剪切過程中的封閉喚醒RNA分子,,主要由外顯子和(或)內(nèi)含子構成,。環(huán)狀RNA參與了復雜的RNA-RNA的相互作用網(wǎng)絡,在基因轉錄后調控中發(fā)揮作用,;環(huán)狀RNA可直接與蛋白質結合,,也可通過RNA介導間接與蛋白質發(fā)生關聯(lián),影響蛋白質功能,;部分環(huán)狀RNA具有翻譯功能,。研究發(fā)現(xiàn),環(huán)狀RNA與一些疾病的發(fā)生,、發(fā)展具有直接關聯(lián),,為一些疾病發(fā)病機制提供了新思路,除此之外,,環(huán)狀RNA在與衰老,、炎癥等生理、病理現(xiàn)象方面也有重大應用,。
總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出,。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),,兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S),。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8,。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,,18S大約在1kb的位置,,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,,如果不即刻加入氯仿之前,,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,,2-8°C可以保存一周,,-20°C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短,,容易降解,,建議提取后盡快進行后續(xù)實驗,如反轉錄成cDNA,,NorthernBlot等,。研缽150度烘烤4小時,離心管,、吸頭用DEPC處理,。
拭子RNA提取試劑的選擇,?拭子樣本的量與提取的核酸量成正比,如果要提高核酸得率,,也可通過增加樣本量來實現(xiàn),。一般先取一根拭子的涮洗液樣本,然后進行提取,,如結果不理想可考慮增加樣本量或重新采樣,。但如果增加樣本量或重新采樣還不能得到滿意結果,應及時考慮更換試劑盒,。目前國內(nèi)常用的拭子核酸提取試劑有Q,、Biog等,。根據(jù)我們的經(jīng)驗,,Q和T品牌試劑盒的拭子RNA提取得率(一根口腔拭子在口咽部來回刮擦10次)在0.5-3.5ug。同樣處理的口咽拭子,,Biog試劑盒的提取得率在1-4ug,,基本上都能滿足下游PCR相關實驗的要求??梢杂?60nm波長分光測定RNA濃度,,OD值為1相當于大約40μg/ml的單鏈RNA。南昌RNA提取試劑價格
當然還有其它的進口試劑盒,,但是均存在價格高,、訂貨周期長的問題。天津RNA提取試劑推薦廠家
總RNA提取試劑是一種快速從組織細胞中提取總RNA的單相試劑,。在樣品裂解過程中TRIzol能夠壓制RNA酶活性保持RNA完整性,;加入氯仿后離心,RNA相將與DNA和蛋白質分離,,隨后用異丙醇沉淀RNA,。如果需要還可以繼續(xù)提取DNA和蛋白質。純化的總RNA可用于RT-PCR,、NorthernBlot,、RNA酶保護、Poly(A)mRNA純化,、體外翻譯等實驗,。是一種快速從組織細胞中提取總RNA的單相試劑。在樣品裂解過程中TRIzol能夠壓制RNA酶活性保持RNA完整性,;加入氯仿后離心,,RNA相將與DNA和蛋白質分離,隨后用異丙醇沉淀RNA,。如果需要還可以繼續(xù)提取DNA和蛋白質,。純化的總RNA可用于RT-PCR,、NorthernBlot、RNA酶保護,、Poly(A)mRNA純化,、體外翻譯等實驗天津RNA提取試劑推薦廠家