外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷:近年來(lái)眾多文獻(xiàn)報(bào)道,肺病細(xì)胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質(zhì)并促進(jìn)肺病的發(fā)生的發(fā)展,,是早期診斷肺病的有效途徑,。有研究發(fā)現(xiàn),NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽(yáng)性的占80%,,而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽(yáng)性的只占2%,,因而認(rèn)為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標(biāo)志物。Park等通過(guò)Sys-BodyFlu-id數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質(zhì),,進(jìn)一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號(hào)傳導(dǎo)途徑以促進(jìn)一些病癥的發(fā)生的發(fā)展,因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學(xué)標(biāo)記物,。近幾年來(lái),,市場(chǎng)上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒。外泌體的提取方法:多聚物沉淀法,。唐山正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹
外泌體(Exosome)是細(xì)胞主動(dòng)分泌的囊泡樣小體,,大小均一,直徑30-200nm,,密度1.10-1.18g/ml,,來(lái)源普遍,幾乎所有細(xì)胞都可分泌,在血液,,尿液,,唾液,腦脊液,,腹水,,乳汁等體液中普遍分布。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中,。1996年,,研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細(xì)胞依賴的抗一些病癥反應(yīng),開(kāi)啟了外泌體蛋白研究的新天地,。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)解答了細(xì)胞如何組織其內(nèi)部較重要的運(yùn)輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘,。超離法因操作簡(jiǎn)單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受?歡迎,,但過(guò)程比較費(fèi)時(shí),,且回收率不穩(wěn)定,純度也受到質(zhì)疑,。貴陽(yáng)外泌體提取試劑供應(yīng)商外泌體的提取分離:PEG-base沉淀法,。
外泌體在肺病治病中的作用:有研究發(fā)現(xiàn),,使用外泌體運(yùn)載紫杉醇(PTX)可顯著提高病細(xì)胞對(duì)PTX的吸收,,將PTX加載至外泌體中顯著增加了藥物細(xì)胞毒性,Exo-PTX能顯著壓制肺病的發(fā)展,。Aqil等在進(jìn)行裸鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn),,加載至外泌體中的雷公藤紅素(Exo-CEL)比普通的CEL有更強(qiáng)的抗一些病癥功效,,且在小鼠中未發(fā)現(xiàn)明顯全身性或系統(tǒng)性毒性,由此可以證明,,外泌體制劑可以有效增強(qiáng)CEL功效并降低與劑量有關(guān)的毒性,。到目前為止,外泌體在肺病治病方面的研究主要集中于免疫壓制,,有效的外泌體藥物遞送平臺(tái)的搭建以及外泌體相關(guān)的潛在治病靶點(diǎn)的探索,。已有的研究表明外泌體在肺病治病領(lǐng)域有著廣闊的前景,期待外泌體在肺病治病領(lǐng)域早日得到突破,,造福更多的患者,。正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商通過(guò)超速離心(120000g/分鐘)20小時(shí)以上才能獲得足夠的外泌體量。
外泌體的提取,、分離方法:梯度密度離心法,。研究發(fā)現(xiàn),外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,,因此,,可以采用密度梯度離心法來(lái)分離外泌體,。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,原理是先除去非囊泡物質(zhì),,再通過(guò)梯度密度濃縮提取外泌體,,該方法可以得到相對(duì)較為純凈的外泌體。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,,但是2012年,,研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,因此,,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體,。如果離心時(shí)間不充足,污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,,特別是這個(gè)密度范圍又比較寬,。通過(guò)密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。
外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法,。此種方法得到的外泌體量多,,但是純度不足,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,,由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),,也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心,,這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí),,不影響外泌體的生物活性,,但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法,,用此種方法分離到的外泌體純度高,,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時(shí),,量少,。、以提取尿液中的外泌體為例,,每次至少需要200毫升的尿液量。深圳外泌體提取試劑廠家直銷
外泌體的提取方法:磁珠免疫法,。唐山正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹
所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開(kāi)始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),,無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開(kāi)發(fā)。1983年,,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。唐山正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹