鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,對(duì)于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究,。目的:探討鼠尾膠原對(duì)過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實(shí)驗(yàn)組)和普通培養(yǎng)皿(對(duì)照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導(dǎo),。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率,TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測(cè)丙二醛水平,Western-Blot檢測(cè)凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá),。鼠尾膠原蛋白的用途是什么：顧名思義,，鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來的物質(zhì),。南昌正規(guī)鼠尾膠原報(bào)價(jià)

鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞（特別是上皮細(xì)胞）貼壁的作用，同時(shí)它也是一種天然的黏附劑,，當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,，制備細(xì)胞爬片時(shí),，可在瓶底涂一層膠原，再放上小玻片,，自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中,。通過本實(shí)驗(yàn)可掌握鼠尾膠原的制備方法,，以及如何切割小玻片，并利用鼠尾膠原將其固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料：大鼠尾巴,、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管,、平皿,、三角燒瓶,、燒杯、量筒,、天平、生理鹽水,、75%酒精,、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆,、鼠尾膠原。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1,、制備鼠尾膠原,。2、切割小玻片,。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,，并且制作簡便，成本低廉,。南京鼠尾膠原報(bào)價(jià)鼠尾膠原醋酸溶解：建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。

鼠尾膠原凝膠體在皮膚細(xì)胞原代培養(yǎng)中的應(yīng)用：在國外的藥理,毒理和皮膚病學(xué)的研究領(lǐng)域中已得到的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細(xì)胞的材料和方法r1]實(shí)驗(yàn)材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細(xì)胞生長因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細(xì)胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細(xì)胞的分離和細(xì)胞懸液的制備:2～3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細(xì)胞懸液,加入細(xì)胞培養(yǎng)液.用梯度離心收集細(xì)胞,以3xi0/m]濃度接種平皿.(3)鼠尾膠原凝膠體的制備:具體方法參見文獻(xiàn)c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中30rain,散盡剩余氨氣。

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動(dòng)或攪拌,。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜,。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,，這時(shí)候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：通過醋酸抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠,，模擬真實(shí)的生長環(huán)境，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長,。1,，在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長,。1mg/ml濃度以上,，pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠,，檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長,、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長。使用方法：1,、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml,。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中,。深圳正規(guī)鼠尾膠原廠家供應(yīng)

利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物,，該模型是進(jìn)行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ),。南昌正規(guī)鼠尾膠原報(bào)價(jià)

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水,、無菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I,。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟,。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）,。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計(jì)算體積,，混勻,，冰上備用,。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時(shí)。6）使用時(shí),，無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min,。南昌正規(guī)鼠尾膠原報(bào)價(jià)