細胞凍存，我們應該注意哪些事項：1,、液氮內的細胞凍存較長時間不要超過半年,，凍存在液氮中的細胞應一段時間內進行更替,。一個細胞系在培養(yǎng)一個月后,，可復蘇一管新的細胞確保其質量沒有發(fā)生太大變化,，傳代幾次后,，再凍存留種,。2、細胞復蘇時,，為保證獲得較高的存活率和接種率，應盡可能的快速完成復蘇,，以避免在升溫過程中細胞內部晶體的產生,。書面介紹的復蘇溫度是37℃-42℃,，但是本人在實際操作中發(fā)現40℃環(huán)境下復蘇效果較好。3.復蘇時使用的培養(yǎng)基和凍存時使用的培養(yǎng)基中的血清盡量保證同一批次,。無血清凍存液注意事項：凍存液中含DMSO成分,，為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套,。上海唐山無血清細胞凍存液

細胞凍存秘籍：1.在倒置相差顯微鏡上每隔幾分鐘檢查酶處理的進展情況,。一旦細胞變圓,，輕輕敲擊細胞瓶使其脫離塑料表面,。加入5mL含血清的生長培養(yǎng)基滅活胰酶,?？赡苄枰獎×业囊埔翰僮鱽硎古囵B(yǎng)容器底部的剩余細胞脫落,，或將細胞團塊分解成單細胞懸浮液。胰酶的去除或失活對于冷凍細胞至關重要,。如果游離試劑不能直接滅活,，可以通過下一步的離心去除,。2.用15ml離心管收集細胞。取出樣本進行細胞計數,，剩余的細胞懸液以約100×g離心5分鐘以獲得細胞沉淀,。離心時,，用細胞計數板對細胞進行計數。使用臺盼藍染液檢查細胞的活性,。上海唐山無血清細胞凍存液無血清快速細胞凍存液：含動物來源的血清成分，能夠有效提高細胞凍存活率和復蘇活力,。

無血清快速細胞凍存液,，通用于各種動物細胞株,。特別配方具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力,。不含動物來源性蛋白,，能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,，確保凍存細胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細胞的凍存,，也適用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞的凍存,。產品特色：1.高安全性,，完全使用醫(yī)藥品等級原料進行生產，不含動物成分,，病毒,、霉菌和支原體等污染可能性低,，各批產品之間有更高的產品質量一致性,。2.細胞存活率高,，無批次差異,。3.完全凍存液配方，可直接使用,，方便簡捷,，可直接存放于-80℃冰箱凍存,，無需經過費時的程序降溫過程（省時、省力,、省錢）。

細胞凍存注意事項：1,、從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存,，但為對數生長期細胞,。在凍存前一日換一次培養(yǎng)液;2,、將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作,，以免凍壞;3,、凍存和復蘇用新配制的培養(yǎng)液。4,、取細胞的過程中注意帶好防凍手套,，護目鏡。此項特別重要,，細胞凍存管可能漏入液氮,，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致炸列,。凍存液產品針對細胞凍存的特殊配方,，能較大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷，有效提高細胞復蘇率和活力,。無血清細胞凍存液使用方法：緩慢地混合均勻,，制成細胞混合液。

細胞凍存的操作步驟：1.配制含10%DMSO或甘油,、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液,；2.取對數生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗,。3.去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來,；4.離心1000rpm,，5min；5.去除胰蛋白酶,，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,，用吸管輕輕吹打使細胞均勻,，計數，調節(jié)凍存液中細胞的較終密度為5×106/ml～1×107/ml,；6.將細胞分裝入凍存管中,，每管1～1.5ml；7.在凍存管上標明細胞的名稱,，凍存時間及操作者,；8.凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min；當溫度達-25℃以下時,，可增至-5℃～-10℃/min,；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中,。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管,，移入液氮容器內,。無血清細胞凍存液用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。無血清細胞凍存液產品介紹

無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：可培養(yǎng)板整板凍存,，例如雜交瘤細胞凍存時可節(jié)省篩選過程,。上海唐山無血清細胞凍存液

使用方法：1)細胞超凈臺無菌環(huán)境，1.5mlEP管內加入細胞混懸劑均勻混懸細胞,，細胞終濃度為5×106個/ml,，混懸液體積為200μl。細胞凍存劑冰水混合物中預冷,，逐滴加入細胞凍存劑800μl,，細胞混懸劑與細胞凍存劑的體積比控制在1:4,。2)開啟程序性降溫,，降溫速率為1℃/min，較后降溫至-80℃以下進行凍存,。將比較例1凍存后細胞的復蘇率與實施例5凍存后細胞的復蘇率進行對比,，具體結果如附圖1所示，可見采用本發(fā)明的凍存方法能夠明顯提高細胞的復蘇率,。其他實施例通過與比較例1進行比較,，也得到相同的試驗結果。本發(fā)明的凍存方法不僅可以明顯提高凍存后細胞復蘇率,，同時還可減少不同批次細胞凍存復蘇率不穩(wěn)定,、以及避免由血清中的支原體，細菌,，朊細菌及其他細菌顆粒引發(fā)的污染,。上海唐山無血清細胞凍存液