外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）。超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心,、高速離心交替進行，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費時,，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)）,，純度也受到質(zhì)疑；此外,，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心,。在超速離心力作用下,，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣,，耗時,，對離心時間極為敏感。來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中,。重慶正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價

PS不是你想有，想有就能有,，迄今為止所發(fā)現(xiàn)的外泌體,，并非所有的外膜表面都暴露PS。例如,，細菌來源的外泌體膜表面沒有PS,，因此，本款試劑不能提取這種外泌體?，F(xiàn)在的研究尚未得知是否所有的外泌體上都會露出PS,，但是上述的外泌體標(biāo)記根據(jù)細胞種類不同表現(xiàn)出的信號強弱差大，通過利用本試劑盒PS親和法捕捉,、提取外泌體是較好的方法,。：這個MagCapture?ExosomeIsolationKitPS，1次提取的外泌體量大概是多少,？實驗樣品的種類和體積不同,，提取的外泌體量也不一樣。Wako的操作實例中,，一次提取操作可獲得蛋白量約30μg/mL（BCA法檢測）,，粒子數(shù)1~2×1010（NanoSightLM10檢測）（經(jīng)莫能菌素鈉刺激外泌體分泌的K562培養(yǎng)上清5mL濃縮為1mL后，對其進行提?。?。另外，和光驗證了從1mL正常人混合血清提取一次,，可回收約34μg/mL蛋白質(zhì)（BCA法檢測）,，約5×109/mL的粒子數(shù)（NanoSightLM10檢測）。本試劑盒終可獲得100μL的洗脫液,。金華外泌體提取試劑靜置10～15分鐘,，留取沉淀物備用,。

1983年,，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”,。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,，且外泌體天然存在于體液中,，包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊,，對外泌體的研究興趣日益增長,，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵

外泌體（exosomes）是活細胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡,，來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),，直徑約為30-150nm，密度在1.13-1.21g/ml,，天然存在于血液,、唾液、尿液及母乳等體液中,，同時外泌體也存在于組織和細胞間隙中,。人體中幾乎所有類型的細胞均能產(chǎn)生外泌體，人體中大約有1014個外泌體,，大約平均每個細胞產(chǎn)生1000-10000個,。外泌體中含有核酸（DNA、miRNA,、lncRNA,、mRNA、tRF等）,、蛋白和脂類,，在細胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，研究表明其在干細胞,、免疫調(diào)控,、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用,。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量,。

外泌體鑒定：外泌體分離之后，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,，多角度進行鑒定,。l透射電鏡鑒定法：簡稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。l納米顆粒追蹤分析法：簡稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測：外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,，如CD9,、CD63和CD81；細胞質(zhì)蛋白,，如肌動蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）,；使用可截留100KD分子量的膜，通過離心截留上清中的外泌體,，截留完成后,。外泌體的提取方法：密度梯度離心。太原正規(guī)外泌體提取試劑廠家

將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮,，使外泌體懸浮于液體上層,。重慶正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價

外泌體的提取分離：1、超濾離心,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,，大于一般蛋白質(zhì)，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,，便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性,，是提取細胞外泌體的一種新方法,。2、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63,、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗,，難以普遍普及,。重慶正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價