外泌體，是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),，但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物,。然而較近幾年，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸,，能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對細(xì)胞分泌膜泡的興趣,。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,，如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等,。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。外泌體提?。焊鶕?jù)外泌體的大小，從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體,。長沙正規(guī)外泌體提取試劑銷售廠家

外泌體（exosome）,，特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?，F(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細(xì)胞有：肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、樹突狀細(xì)胞,、瘤細(xì)胞,、間充質(zhì)干細(xì)胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞,、瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。同時,，不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì),、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,，包括外泌體,、微泡和凋亡小體。溫州外泌體提取試劑廠家外泌體提?。壕垡叶迹≒EG）為常用的多聚物,，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀。

外泌體的提取的方式：1,、免疫磁珠法,，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高,、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,，不便進(jìn)行下一步的實驗,。2、PS親和法,，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合,，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,，獲得的外泌體形態(tài)完整,，純度較高。由于不使用變性劑,，不影響外泌體的生物活性,，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù),，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體,。六是色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設(shè)備,，應(yīng)用不普遍,。

將濃縮液加至20mmol/LTris/30%蔗糖/45%蔗糖(pH7.4)的密度梯度液上行4℃超速離心100000×g(水平轉(zhuǎn)子SW-41)8h,吸取位于蔗糖之上的顏色明顯較深條帶的液體約5mL,以10倍PBS稀釋混勻后再次用100-ku超濾離心管(Millipore)濃縮至5mL,將濃縮液重新以10倍PBS稀釋后4℃超速離心100000×g(角轉(zhuǎn)子TYPE50.2)4h,收集離心管底部約1mL液體及極微量沉淀(來自2×107個細(xì)胞)以20mLPBS重懸即為胞外體,用0.22μm過濾膜除菌后凍存于-80℃?zhèn)溆谩＃ㄔ摬襟E參考文獻(xiàn)“腫瘤細(xì)胞來源胞外體的分離鑒定與功能檢測”）優(yōu)點(diǎn)是：分離得到的外泌體純度很高,。缺點(diǎn)是：步驟繁瑣、耗時耗力,、對離心時不好把握,。外泌體提取：差速離心,。差速離心仍然是較常見的外泌體分離技術(shù)之一,。

外泌體研究的主要應(yīng)用：外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答,、抗原提呈,、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化,、一些病癥侵襲等方方面面,。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,，促進(jìn)了一些病癥的生長與侵襲,。一些病癥。一些病癥轉(zhuǎn)移,。來自白血病干細(xì)胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血?。ˋML）細(xì)胞的增殖、遷移和壓制細(xì)胞凋亡,。治病靶標(biāo),。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D，從而特異性高效靶向至胰腺病細(xì)胞,，以明顯降低RAS活化,、病細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過程。免疫,。β細(xì)胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細(xì)胞外,，并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細(xì)胞，有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗,。心血管,。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細(xì)胞的損傷促進(jìn)動脈硬化。分子標(biāo)記,。疾病診斷,。在酒精性肝病、NASH,、菌類性肝炎,、藥物性肝損傷和肝細(xì)胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升,。預(yù)后標(biāo)志外泌體(Exosome)是從體液(尿液、血液,、唾液,、腹水、胸腹水等)和細(xì)胞液中快速提取的,。南京正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應(yīng)

如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵,。長沙正規(guī)外泌體提取試劑銷售廠家

外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白）,，用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗，難以普遍普及,。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集菌類，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物。長沙正規(guī)外泌體提取試劑銷售廠家