外泌體與免疫系統(tǒng):不同的細胞來源的外泌體,,包括免疫細胞(B細胞和樹突狀細胞),、病細胞、上皮細胞和間充質細胞,,釋放出帶有載體的外泌體,,可影響先天免疫系統(tǒng)和適應性免疫系統(tǒng)中受體細胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T細胞可直接或間接地受到外泌體的影響,,刺激或壓制其增殖和功能,。外泌體與代謝性和心血管疾病:外泌體可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過程中起作用,。體外培養(yǎng)心血管疾病的細胞收集的外泌體與疾病相關的代謝適應有關,;體外培養(yǎng)的間充質干細胞和胚胎干細胞的外泌體具有保護心血管的作用。這些發(fā)現表明不同來源的外泌體可以通過傳遞miRNA,,蛋白等物質改變受體細胞的代謝狀態(tài),。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構普遍地應用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷早先應用于從血清等樣本中收集細菌,現在也被用來沉淀外泌體,,其原理可能與競爭性結合游離水分子有關,。南京正規(guī)外泌體提取試劑供應商
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,,這是目前外泌體提取較常用的方法,。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,,電鏡鑒定時發(fā)現外泌體聚集成塊,,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心,,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,,但同樣存在純度不足的問題,。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,,但是前期準備工作繁雜,,耗時,量少,。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構普遍地應用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷,。珠海正規(guī)外泌體提取試劑進貨價用于外泌體提取的體液收集注意事項:操作要輕柔迅速。
1983年,,外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發(fā)現,,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液、唾液,、尿液、腦脊液和乳汁中,。有關他們分泌和攝取及其組成,、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,,參與細胞間通訊,,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。如何高效地提取外泌體是實現這項新興液體活檢技術臨床常規(guī)化應用的關鍵
外泌體表面有其特異性標記物(如CD63,、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,,即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,,難以普遍普及。聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀,早先應用于從血清等樣本中收集菌類,,現在也被用來沉淀外泌體,,其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),,顆粒大小不均一,產生難以去除的聚合物,,機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,,因此發(fā)表文章時易受質疑。如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),,顆粒大小不均一,產生難以去除的聚合物,。近年來,,隨著人們對外泌體的研究和認識加深。
外泌體提?。撼叽缗抛枭V,。尺寸排阻色譜(Size-exclusionchromatography,SEC)是基于大小而非分子量實現分離大分子,。該技術應用填充多孔聚合物微球的柱子,,分子根據其直徑通過微球,半徑小的分子需要更長的時間才能通過色譜柱的孔隙遷移,,而大分子則從色譜柱中更早地洗脫,。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子。此外,,可以將不同的洗脫溶液應用于該方法,。與離心方法相比,色譜分離已被證明具有更多優(yōu)勢,,因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,,這可能會改變囊泡的結構。目前,,SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術,。不過,該方法耗時較長,,不適合大量樣本處理外泌體提?。嚎梢詫⒉煌南疵撊芤簯糜谠摲椒ā幉ㄕ?guī)外泌體提取試劑廠家
外泌體提?。焊鶕饷隗w的大小,,從蛋白質和其他大分子中分離外泌體,。南京正規(guī)外泌體提取試劑供應商
外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,直徑約為30-200nm,,密度在1.13-1.21g/ml,,具有杯狀形態(tài)、雙層膜結構,,天然存在于血液,、尿液、唾液,、母乳和細胞培養(yǎng)基等生物體液中,。包括瘤細胞在內幾乎所有類型的細胞(免疫細胞、神經細胞,、干細胞),,都可以產生并釋放exosome。Exosome內含有與細胞來源相關的蛋白質rRNA和microRNA,,Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞,,也可運輸蛋白質、mRNA,、miRNA,、lncRNA、circRNA,,甚至細胞器進入受體細胞,,參與細胞間通訊。Exosome在免疫應答,、炎癥反應,、血管生成、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關鍵作用,不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,,可作為多種疾病的早期診斷標記物,,也能作為靶向藥物的載體進行疾病。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子,,它可以通過外泌體從一個地方轉運到另外一個地方行使基因沉默功能,。通過檢測外泌體中miRNA表達變化,可以發(fā)現外泌體中miRNA特異性功能南京正規(guī)外泌體提取試劑供應商