外泌體的提取分離:1,、超濾離心,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì),,利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離,,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,,且不影響外泌體的生物活性,,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。2,、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63、CD9蛋白),,用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,但是效率低,,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,難以普遍普及,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,,雜蛋白較多。鄭州正規(guī)外泌體提取試劑單價
外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷:近年來,,高通量質(zhì)譜分析被普遍地應(yīng)用于篩選NSCLC外泌體蛋白的研究,,這為我們揭示了更多具有生物標(biāo)志物價值的分子。Birgitte等采用微陣列芯片技術(shù)研究了431例肺病患者和150例對照者血漿外泌體中的蛋白表達(dá)情況,,發(fā)現(xiàn)CD151,、CD171和TSPAN8這三種蛋白表達(dá)不光能區(qū)分一些病癥與正常組織,同時也能區(qū)分各種肺病的組織亞型,。此外,,聯(lián)合應(yīng)用這三種蛋白診斷NSCLC的AUC達(dá)到0.74。Clark等采用納升液聯(lián)用技術(shù)(nano-ESI-LC-MS/MS)分析了來自正常支氣管上皮細(xì)胞系和兩個攜帶NSCLC細(xì)胞系的外泌體的蛋白表達(dá)譜,,從中篩選出如細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子,、溶酶體膜糖蛋白2等多種存在顯著性差異表達(dá)的蛋白,同時檢測分析這些蛋白有助于提高NSCLC診斷的敏感性和特異性,。由于國內(nèi)有關(guān)外泌體提取試劑的缺乏,,我國對外泌體的研究還基本依賴于過程繁瑣的超速離心和進(jìn)口提取試劑盒。貴陽外泌體提取試劑進(jìn)貨價外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,,難以普遍普及,。
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外泌體(Exosome)是細(xì)胞主動分泌的囊泡樣小體,,大小均一,直徑30-200nm,,密度1.10-1.18g/ml,,來源普遍,幾乎所有細(xì)胞都可分泌,,在血液,,尿液,唾液,,腦脊液,,腹水,乳汁等體液中普遍分布,。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中,。1996年,研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細(xì)胞依賴的抗一些病癥反應(yīng),,開啟了外泌體蛋白研究的新天地。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎解答了細(xì)胞如何組織其內(nèi)部較重要的運輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘,。超離法因操作簡單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受?歡迎,,但過程比較費時,且回收率不穩(wěn)定,,純度也受到質(zhì)疑,。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層,。
外泌體作為近幾年來的研究熱點,,受到了科研工作者的青睞及追捧。由于外泌體內(nèi)攜帶有大量的miRNA,少量lncRNA,Mrna以及DNA蛋白質(zhì)成為液體活檢的潛力無限的研究對相,。所以,,獲得純度高、內(nèi)容物完整的外泌體非常之重要,,那么,,外泌體的提取方法也顯得尤為重要。一,、差速離心法差速離心法可以說是傳統(tǒng)普遍的外泌體提取方法,。原理是:首先低速離心以除去細(xì)胞和細(xì)胞凋亡碎片;隨后,,高速離心以去除大囊泡,;高速離心以沉淀外泌體。蘇州君欣生物科技有限公司磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點。成都正規(guī)外泌體提取試劑廠家
外泌體的提取方法:密度梯度離心,。鄭州正規(guī)外泌體提取試劑單價
外泌體的提取,、分離方法:開發(fā)高效、快速,、穩(wěn)定,,并且保持外泌體結(jié)構(gòu)和生物功能完整性的方法,是目前外泌體應(yīng)用于臨床的基礎(chǔ)和前提,。從細(xì)胞上清和體液中提取分離外泌體的方法很多,,但是外泌體的純度和產(chǎn)量卻和分離方法息息相關(guān)。通常分離步驟少,、產(chǎn)率高,,但是純度會受到影響。鑒于每種分離方法都有其優(yōu)缺點,,實驗可以根據(jù)樣本來源,、下游實驗?zāi)康牡龋x擇合適的外泌體分離方法。2015年,,國際囊泡組織(InternationSocietyforExtracelluarVesicles,ISEV)指出,,簡單依靠一種分離方法得到的外泌體的純度和產(chǎn)量都難滿足實驗的需求。因此,,推薦聯(lián)合使用各種方法,,從而得到高純度和高產(chǎn)量的外泌體。鄭州正規(guī)外泌體提取試劑單價