產(chǎn)品特性：a.可直接放置于-80℃冰箱,，無需降溫，節(jié)省時(shí)間和精力,；b.即用型,，無需現(xiàn)配，操作方便,，可減少實(shí)驗(yàn)中因操作引起的污染,；c.在多種哺乳細(xì)胞系中經(jīng)過性能驗(yàn)證，其復(fù)蘇率和活率達(dá)90%以上,；d.可長期存儲于-80℃冰箱(5年以上),，取用方便,；e.采用成分明確的無血清配方,，價(jià)格比常規(guī)自配細(xì)胞凍存液更為低廉；保存溫度：2~8℃具體操作步驟：1,、培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中細(xì)胞按常規(guī)方法消化,，或分離獲得原代細(xì)胞后，收集于離心管中,。2,、使用離心機(jī)離心，去除上清,，收集細(xì)胞沉淀,。3、根據(jù)細(xì)胞生長密度加入適量的細(xì)胞凍存液進(jìn)行重懸,，充分混勻(推薦凍存密度為1-2×106/ml),。4,、將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中，直接放置于-80℃冰箱保存,。24小時(shí)后可移入液氮長期保存(可選),。無血清細(xì)胞凍存液使用方法：直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-80℃以下冰箱，長期冷凍保存,。寧波正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液報(bào)價(jià)

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,，這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。細(xì)胞凍存的原理：細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力,。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。鄭州無血清細(xì)胞凍存液哪家便宜無任何外源蛋白和血清,，適用于各類動物細(xì)胞株凍存,。

細(xì)胞凍存的操作步驟：1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液,；2.取對數(shù)生長期的細(xì)胞,，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗,。3.去除PBS,，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來；4.離心1000rpm,，5min,；5.去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的較終密度為5×106/ml～1×107/ml,；6.將細(xì)胞分裝入凍存管中,，每管1～1.5ml；7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,，凍存時(shí)間及操作者,；8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/min,；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min,；到-100℃時(shí),，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,，然后放入-70℃冰箱中過夜,，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi),。

細(xì)胞凍存配制含10%DMSO或甘油的細(xì)胞凍存液,，4℃預(yù)冷（新鮮配制的凍存液會產(chǎn)生大量的熱）；取對數(shù)生長期的細(xì)胞,，用細(xì)胞消化酶將單層生長的細(xì)胞消化下來,；懸浮細(xì)胞則直接將細(xì)胞收集到離心管中；離心1200rpm,，6min,；去除上清液，逐漸加入適量預(yù)冷的細(xì)胞凍存液,，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中的細(xì)胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml,；將細(xì)胞分裝入凍存管中,，每管1~1.5ml；在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,、凍存時(shí)間及操作人員姓名,；凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/min；到達(dá)-80℃時(shí),，則可迅速放入液氮中,。即用型產(chǎn)品，4℃可穩(wěn)定保存,。

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇操作步驟：細(xì)胞凍存和復(fù)蘇采取“慢凍快融”的原則,，慢速冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水份滲出細(xì)胞外,，減少細(xì)胞內(nèi)形成冰晶的機(jī)會,，快融以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化，避免慢速融化水份滲入細(xì)胞內(nèi),，再次形成胞內(nèi)冰晶造成對細(xì)胞的損傷,。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力,。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷,。存細(xì)胞時(shí)需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液。長沙正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液銷售廠家

在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù),，較大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率,。寧波正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液報(bào)價(jià)

使用方法：1)細(xì)胞超凈臺無菌環(huán)境，1.5mlEP管內(nèi)加入細(xì)胞混懸劑均勻混懸細(xì)胞,，細(xì)胞終濃度為5×106個(gè)/ml,，混懸液體積為200μl。細(xì)胞凍存劑冰水混合物中預(yù)冷,，逐滴加入細(xì)胞凍存劑800μl,，細(xì)胞混懸劑與細(xì)胞凍存劑的體積比控制在1:4。2)開啟程序性降溫,，降溫速率為1℃/min,，較后降溫至-80℃以下進(jìn)行凍存。將比較例1凍存后細(xì)胞的復(fù)蘇率與實(shí)施例5凍存后細(xì)胞的復(fù)蘇率進(jìn)行對比,，具體結(jié)果如附圖1所示,，可見采用本發(fā)明的凍存方法能夠明顯提高細(xì)胞的復(fù)蘇率。其他實(shí)施例通過與比較例1進(jìn)行比較,，也得到相同的試驗(yàn)結(jié)果,。本發(fā)明的凍存方法不僅可以明顯提高凍存后細(xì)胞復(fù)蘇率，同時(shí)還可減少不同批次細(xì)胞凍存復(fù)蘇率不穩(wěn)定,、以及避免由血清中的支原體,，細(xì)菌，朊細(xì)菌及其他細(xì)菌顆粒引發(fā)的污染,。寧波正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液報(bào)價(jià)