三維膠原的制備：鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,，pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,，在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌,、預(yù)冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A．不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O,。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。期間不斷攪拌,，防止凍結(jié)成塊，得到膠原溶脹液,。上海鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

鼠尾膠原蛋白I型,，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,，這時候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。論鼠尾膠原能促進毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。南昌正規(guī)鼠尾膠原進貨價膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結(jié)構(gòu)的主要組成,。

鼠尾膠原：鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑,。實驗設(shè)備及材料：大鼠尾巴、剪刀,、鑷子,、止血鉗、彎頭吸管,、平皿,、三角燒瓶、燒杯,、量筒,、天平、生理鹽水,、75%酒精,、0.1%醋酸溶液、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶、鉆石筆,、鼠尾膠原,。實驗內(nèi)容：1、制備鼠尾膠原（兩個同學(xué)一組操作）,。2,、切割小玻片。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。制備鼠尾膠原：1、取大鼠尾巴洗凈,，75%酒精浸泡5分鐘,；2、手持尾巴,，用止血鉗夾住鼠尾的,，折斷尾骨后拉出尾腱；3,、將尾腱剪斷置于平皿中,，生理鹽水浸泡；4,、重復(fù)步驟2,、3,，直至尾腱量夠用；5,、吸去生理鹽水,，將尾腱稱重（0.5-1克）；6,、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎,，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中；7,、按每克尾腱50ml的比例,，加入0.1%醋酸溶液；8,、搖晃,，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置一星期,；9,、離心，4000轉(zhuǎn)/分,，10-15分鐘,；10、吸取上清,，分裝成小瓶,，4℃保存。

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌,。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提,、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞,。也可用于制備三維膠,，模擬真實的生長環(huán)境，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長,。1,，在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上,，pH左右時可形成具有一定強度的三維膠,，檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長,。使用方法：1,、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,。鼠尾膠原醋酸溶解：將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,。青島正規(guī)鼠尾膠原單價

制備鼠尾膠原：吸取上清，分裝成小瓶,，4℃保存,。上海鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

I型鼠尾膠原是借鑒NavneetaRajan,JasonHabermehl法，經(jīng)過乙酸抽提,、離心,、滅菌、透析等步驟制備得到的高純度,、高活性膠原蛋白，屬于醫(yī)藥級別產(chǎn)品,，可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿（單分子層包被）,，適合多種類型細(xì)胞的貼壁如肝臟細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,、胚胎細(xì)胞,、肌細(xì)胞、肺細(xì)胞,、神經(jīng)鞘細(xì)胞等,。I型膠原蛋白包被細(xì)胞培養(yǎng)板，規(guī)格為6/24孔板,，表面經(jīng)I型膠原蛋白包被,，可以很好的降低蛋白質(zhì)的吸附。使用這種細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞,，可以獲得良好的細(xì)胞貼壁率,，細(xì)胞增殖速度快,，形態(tài)均一，細(xì)胞培養(yǎng)成功率高,。上海鼠尾膠原產(chǎn)品介紹