外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:純化和富集的完整血漿/血清,,尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體的可用于功能研究,;樣本輸入量多樣;無需耗時的超速離心,,過濾或特殊注射器;無需沉淀試劑,,也無需過夜培養(yǎng),;無需蛋白酶處理;適用于多種物種,;外泌體被純化并且不含任何其他RNA結(jié)合蛋白,;可以使用NanoSight®或電子顯微鏡分析純化的外泌體,以評估近似外泌體大小范圍和濃度,。外泌體(exosomes)是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡,。它普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號分子,,形成了一種全新的細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),,影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)外泌體提取:回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),,純度也受到質(zhì)疑,。貴陽正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應(yīng)
外泌體(Exosome)是細(xì)胞主動分泌的囊泡樣小體,大小均一,,直徑30-200nm,,密度1.10-1.18g/ml,來源普遍,,幾乎所有細(xì)胞都可分泌,,在血液,尿液,,唾液,,腦脊液,腹水,,乳汁等體液中普遍分布,。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中。1996年,,研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細(xì)胞依賴的抗一些病癥反應(yīng),,開啟了外泌體蛋白研究的新天地。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎解答了細(xì)胞如何組織其內(nèi)部較重要的運輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘,。超離法因操作簡單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受?歡迎,,但過程比較費時,,且回收率不穩(wěn)定,純度也受到質(zhì)疑,。貴陽正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應(yīng)外泌體的提取,、分離方法:梯度密度離心法,。
外泌體的提取、分離方法:超高速離心法,。常用的是超高速離心法,,該方法是被譽(yù)為分離外泌體的“金標(biāo)準(zhǔn)”。該方法利用離心力從細(xì)胞培養(yǎng)液或生物流體獲得外泌體,,經(jīng)過400×g,、2000×g、10000×g的低速離心,,除去細(xì)胞及大的細(xì)胞分泌物,;較后超高速100000×g離心得到外泌體[12]。超高速離心因操作簡單,,不需要復(fù)雜的技術(shù)支持,,并且成本相對較低而被普遍使用。但是該方法耗時,、產(chǎn)率低,,得到的外泌體的數(shù)量和質(zhì)量很大程度上受轉(zhuǎn)子的類型、轉(zhuǎn)子沉降角度等因素影響,,其中較主要的問題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體,,但也會有其他的囊泡、蛋白質(zhì)或蛋白和RNA的聚集體,。
外泌體鑒定:外泌體分離之后,,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,,多角度進(jìn)行鑒定,。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測:外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,,如CD9,、CD63和CD81;細(xì)胞質(zhì)蛋白,,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins),;使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,,截留完成后,。磁珠法具有特異性高,、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,。
外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,,可通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體,內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合后釋放其中的小囊泡,。外泌體的直徑在40-110nm之間,,其中包含RNA、蛋白質(zhì),、microRNA,、DN段等多種物質(zhì),存在于血液,、唾液,、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中,。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史,雖然較初被認(rèn)為可能是細(xì)胞的“垃圾”,,所以才被排出來,,但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進(jìn)行細(xì)胞間信息傳遞。如今,,研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中,、一些病癥細(xì)胞發(fā)生的發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用,。外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家
多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。貴陽正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應(yīng)
外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,,EVs),其大小為30-150nm,,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),,含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),,參與細(xì)胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液,、唾液,、尿液、乳汁等,,同時也存在于組織樣本中,,如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,,經(jīng)水浴,、反復(fù)輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,,混勻,置于冰上,。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過程,,包括除雜、濾膜過濾,、超離等,。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡(TEM),、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定,。貴陽正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應(yīng)