外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,,EVs),其大小為30-150nm,,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),,含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),,參與細胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液,、唾液,、尿液、乳汁等,,同時也存在于組織樣本中,,如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進行消化,,經(jīng)水浴,、反復輕輕上下顛倒,,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,,混勻,,置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程,,包括除雜,、濾膜過濾、超離等,。較后用PBS重懸外泌體,,用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定,。外泌體提?。撼x法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,。鄭州外泌體提取試劑哪家好
外泌體(exosome),,特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?,F(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞,、樹突狀細胞,、瘤細胞、間充質(zhì)干細胞等,。外泌體在免疫中抗原呈遞,、瘤的生長與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用,。同時,,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物,。細胞外囊泡是蛋白質(zhì),、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,,包括外泌體、微泡和凋亡小體,。其中,,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì),、細胞因子或遺傳物質(zhì)。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,,而且還包含其行使功能的關鍵分子,。鄭州外泌體提取試劑哪家好重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量,。
外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈,、細胞遷移,、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面,。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,,從而導致大量新生血管的生成,促進了一些病癥的生長與侵襲,。功能:當外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,,其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源,、其物質(zhì)構(gòu)成及運輸,、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。
外泌體(exosomes,,Exos)是細胞分泌的一種膜囊泡,,因其可以將供體細胞的信息通過其攜帶的蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA等傳遞到受體細胞,實現(xiàn)細胞之間的信息交流及物質(zhì)交換,,并且可以作為藥物載體轉(zhuǎn)運藥物而引起科學家的普遍關注(Fig1),。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨特的優(yōu)勢,表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,,使其可以穿透許多生物膜,,提高藥物的運輸效率和靶向性,可以穩(wěn)定存在于血液中,,納米級尺寸明顯增強藥物在瘤部位的滲透滯留效應(permeabilityandretentioneffect,EPR),。目前,許多抗藥物,、基因藥物及藥物均被成功載入外泌體,。但是由于沒有較好的外泌體分離純化和載藥的方法,使得其作為藥物載體的應用受到限制。外泌體提取的方法:過濾,。
外泌體的提取,、分離方法:梯度密度離心法。研究發(fā)現(xiàn),,外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,,因此,可以采用密度梯度離心法來分離外泌體,。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,,原理是先除去非囊泡物質(zhì),再通過梯度密度濃縮提取外泌體,,該方法可以得到相對較為純凈的外泌體,。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,但是2012年,,研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,,因此,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體,。如果離心時間不充足,,污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,特別是這個密度范圍又比較寬,。外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:無需耗時的超速離心,,過濾或特殊注射器。昆明正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體提?。簶颖镜恼扯扰c分離的外泌體純度有顯著的相關性,。鄭州外泌體提取試劑哪家好
外泌體因諾貝爾醫(yī)學獎而被眾人知曉,也因其作為生命信息傳遞者,,在體液中普遍存在及易獲得性等特點被譽為液體活檢"新貴",,成為疾病的精確診斷和治病研究的熱點,尤其是在一些病癥研究領域[,。外泌體作為細胞間通信載體的作用現(xiàn)在已被普遍接受,。外泌體包含胞質(zhì)環(huán)境中富含的DNA,RNA,,蛋白質(zhì)和其它分析物,,研究表明,外泌體中的運轉(zhuǎn)RNA和蛋白質(zhì)與一些病癥的生長密切相關,,有望作為診斷標志物,。研究發(fā)現(xiàn)Vps4A是一個外泌體的重要調(diào)控因子,與肝病的發(fā)生有著密切的關系,,Vps4A基因的表達下調(diào)肝病的發(fā)生及轉(zhuǎn)移相關,。通過microRNA高通量測序發(fā)現(xiàn)Vps4A基因能導致外泌體分泌肝病相關的重要microRNA,與肝病的發(fā)生密切相關。鄭州外泌體提取試劑哪家好