細胞凍存和復(fù)蘇操作步驟：細胞凍存和復(fù)蘇采取“慢凍快融”的原則,，慢速冷凍可使細胞內(nèi)的水份滲出細胞外，減少細胞內(nèi)形成冰晶的機會,，快融以保證細胞外結(jié)晶快速融化,，避免慢速融化水份滲入細胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)冰晶造成對細胞的損傷,。細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法,，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。凍存液中使用的所有原料均應(yīng)符合臨床或藥物需求。南京無血清細胞凍存液

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗,。細胞凍存的原理：細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷,。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷,。成都無血清細胞凍存液服務(wù)電話無血清細胞凍存液存儲條件：推薦將產(chǎn)品分裝成小管后，再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存,。

細胞凍存配制含10%DMSO或甘油的細胞凍存液,，4℃預(yù)冷（新鮮配制的凍存液會產(chǎn)生大量的熱）；取對數(shù)生長期的細胞,，用細胞消化酶將單層生長的細胞消化下來,；懸浮細胞則直接將細胞收集到離心管中；離心1200rpm,，6min,；去除上清液，逐漸加入適量預(yù)冷的細胞凍存液,，用吸管輕輕吹打使細胞均勻,，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中的細胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml,；將細胞分裝入凍存管中,，每管1~1.5ml；在凍存管上標明細胞的名稱,、凍存時間及操作人員姓名,；凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min；到達-80℃時,，則可迅速放入液氮中,。

細胞凍存，我們應(yīng)該注意哪些事項：DMSO快速稀釋會對細胞造成滲透性損傷,，使存活率下降50%,。對于DMSO凍存的細胞,，復(fù)蘇后應(yīng)緩慢稀釋成細胞懸液：1）凍存液：培養(yǎng)基=1:1稀釋成細胞懸液后離心，然后重懸至培養(yǎng)皿中培養(yǎng),，隔天換液,；2）凍存液：培養(yǎng)基=1:10稀釋成細胞懸液，不用離心,，直接放置到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)2-4小時后,，換液。上述兩種方法都是比較常用的細胞復(fù)蘇方法,，后者更適用于原代細胞或比較難養(yǎng)的細胞,。液氮內(nèi)的細胞凍存較長時間不要超過半年，凍存在液氮中的細胞應(yīng)一段時間內(nèi)進行更替,。一個細胞系在培養(yǎng)一個月后,，可復(fù)蘇一管新的細胞確保其質(zhì)量沒有發(fā)生太大變化，傳代幾次后,，再凍存留種,。根據(jù)凍存方式不同可以分為慢速凍存（程序降溫法）與快速凍存（非程序降溫法）。

細胞凍存的注意事項：1,、各種細胞對凍存速度的要求也不一樣,；上皮細胞和成纖維細胞耐受性可能大些，骨髓干細胞－2~－3℃/分鐘合適,；胚胎細胞耐受性較小,，不宜太快?？傊谝婚_始時,，下降速度不能超過－10℃/分鐘。2,、用什么防護劑合適和用量多大,，要依細胞而定，初代培養(yǎng)細胞用DMSO較好,，一般細胞可用甘油,；用量以較小為好。有人認為人皮膚上皮細胞貯存在20%-30%甘油中很好,。3,、原則上細胞在液氮中可貯存多年，但為妥善起見,，凍存一年后,，應(yīng)再復(fù)蘇培養(yǎng)一次，然后再繼續(xù)凍存,。4,、將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作,，以免凍壞,。5、注意自身的安全,，對于來自人源性或病毒傳染的細胞株應(yīng)特別小心,。操作過程中，應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生,，小心有毒性試劑例如DMSO,，并避免尖銳物品傷人等。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：不含血清,，較大減少細胞污染,。石家莊無血清細胞凍存液哪家好

存細胞時需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液。南京無血清細胞凍存液

細胞凍存,，我們應(yīng)該注意哪些事項：1,、凍存液比例一般是培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1或5:4:1；動物種屬的原代細胞凍存液可采用的比例是培養(yǎng)基：血清：DMSO=0:9:1,，即直接用血清重懸細胞再加入DMSO,，盡管如此，原代細胞的復(fù)蘇成活率還是很低,。2,、有文獻表明，細胞以l℃/min的速度冷凍存活率較髙,，因為這一速度可以很好的控制細胞內(nèi)部晶體的產(chǎn)生,。我們實際操作不可能將速度控制的這么精確，目前慣用的就是4℃30min,、-20℃1h30min,、-80℃2h后轉(zhuǎn)入液氮中。南京無血清細胞凍存液