無血清細胞凍存液凍存雜交瘤細胞的優(yōu)勢：簡單,、方便、快捷,。1.即用型,，無需現(xiàn)配，可直接使用,。2.可孔板原位凍存,，可微量凍存，無需使用凍存管,。3.無需程序降溫,，可直接放置-80℃凍存，操作簡單,。4.不含血清,，較大減少細胞污染。5.因不含血清,，批次間差異小,。6.無需液氮，-80℃冰箱長期凍存,。無血清細胞凍存液凍存雜交瘤細胞的方法：1.驗證陽性克隆的細胞培養(yǎng)孔,，將培養(yǎng)基上清小心吸取干凈；2.加入適量Cellregen無血清細胞凍存液,，充分浸潤細胞（無需消化細胞）,；3.蓋上蓋板，直接放入-80℃冰箱,，長期冷凍保存,。存細胞時需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液。青島正規(guī)無血清細胞凍存液推薦廠家

無血清細胞凍存液通用于各種動物細胞株（tumour細胞和常規(guī)細胞）,，大部分的干細胞,，凍存細胞可在-80℃長期保存。不含動物源性蛋白,，不含血清成分,，可有效減少各類細菌、病毒和支原體等污染,，保證凍存細胞的安全,。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養(yǎng)成分，提高細胞存活率和活力,，亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞,。產(chǎn)品優(yōu)勢：1、無需程序性降溫,，可直接將細胞置于-80℃凍存,，凍存液無需稀釋。2,、細胞可于-80℃長期保存,。3、凍存液不含血清等,，較大降低細胞污染的可能性,。保存方法：冰袋運輸，4℃保存,，保質(zhì)期一年,。青島正規(guī)無血清細胞凍存液推薦廠家凍存液中使用的所有原料均應(yīng)符合臨床或藥物需求。

無血清細胞凍存液的使用方法及注意事項：1.將分裝好的細胞凍存管,，直接置于-80度冰箱過夜保存，次日投入液氮中保存即可備注：1,、凍存過程中,，第2步在冰袋附近操作時，低溫避免保護劑對細胞造成損傷,。2,、細胞凍存管一定要保證完全密封，否則在復(fù)蘇過程中有可能會炸（1）提前開啟水浴鍋,，溫度調(diào)節(jié)到37（2）將凍存的細胞冷凍管從液氮中取出,，迅速置于水浴鍋中融化，盡量1min融化,，時間越短,，對細胞影響越小。（3）將融化后的含細胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充分混勻,，（如細胞冷凍保存液為500ul,，則加入到5ml新鮮培養(yǎng)基中，如細胞冷凍保存液位1ml,，則加入10ml新鮮培養(yǎng)基中,。）（4）混勻后立即離心，800轉(zhuǎn),，3min即可離心結(jié)束后棄上清,，加入預(yù)溫的新鮮培養(yǎng)液。（5）混勻后分瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（二氧化碳濃度根據(jù)培養(yǎng)基要求決定,，通常為5%【注意事項】細胞系凍存密度備注正常人成纖維細胞1～310cells/ml雜交瘤細胞1～310cells/ml某些hybridoma會因冷凍濃度太高而在解凍24小時后死去,。

細胞凍存：取出凍存管，注明細胞名稱,，代數(shù),，日期。離心后,，以無菌吸管吸棄上清,，不要吸到底部的細胞沉淀。將細胞沉淀與凍存液充分混勻,，根據(jù)計數(shù)結(jié)果,，將細胞總數(shù)調(diào)節(jié)成細胞數(shù)量為5-10*105/ml為宜。將細胞凍存懸液分裝進細胞凍存管中,，一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜,。嚴密封口后，使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,，使溫度每分鐘大約降低1℃,。或者,，將裝有細胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中,，然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜。若無凍存盒及其他凍存裝置,，可以先將凍存管置于4℃30min,，再-20℃凍存1h直至完全冷凍，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜,。第二天將已經(jīng)冷凍的細胞轉(zhuǎn)移到液氮容器中,，置于液氮上方的氣相空間中儲存無血清細胞凍存液：凍存細胞，無需程序降溫,。

細胞凍存注意事項：1,、細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附,。2,、復(fù)蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復(fù)蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中，分裝過多,，細胞濃度過低,，不利于細胞的貼壁。3,、加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度,，從如果你加培養(yǎng)基的太少,，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長,，從以前的資料來看,，DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響，還有一個說法是1％,。所以如果你的凍存液的濃度是10％DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度,。使細胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷，引起細胞內(nèi)環(huán)境滲透壓,。太原正規(guī)無血清細胞凍存液直銷廠家

快速凍存簡化了凍存步驟,，同時不需要使用梯度凍存盒。青島正規(guī)無血清細胞凍存液推薦廠家

細胞凍存和復(fù)蘇的原則：慢凍速融,，這樣更加有利于保持細胞的活力,。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,，從而使細胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷,，引起細胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH,，電解質(zhì)等的改變,，進而促使細胞死亡。細胞凍存液除去蛋白酶,，添加適量配置好的凍存細胞培養(yǎng)液.細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中,，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費,，而且細胞一旦開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化,。因此及時進行細胞凍存十分必要,。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久,；細胞儲存在液氮中,，溫度達-196℃,，理論上儲存時間是無限的,。青島正規(guī)無血清細胞凍存液推薦廠家