細(xì)胞凍存經(jīng)驗(yàn)談:選對(duì)凍存培養(yǎng)基才是王道：研究人員經(jīng)常需要冷凍細(xì)胞并保存,，以供后續(xù)實(shí)驗(yàn)或臨床使用,。基本過(guò)程相當(dāng)簡(jiǎn)單：慢慢冷凍細(xì)胞,，將凍存管放入液氮中,，并在需要時(shí)快速解凍。凍存培養(yǎng)基能支持細(xì)胞并防止冰晶形成,。不過(guò),，Malfavon的體驗(yàn)告訴我們，使用不同的凍存培養(yǎng)基,，結(jié)果那可是大不同,。一些經(jīng)驗(yàn)老道的研究人員自己制備凍存培養(yǎng)基。不過(guò),，那些面對(duì)脆弱細(xì)胞（比如原代和多能細(xì)胞）的研究人員,，則更喜歡購(gòu)買標(biāo)準(zhǔn)化的商業(yè)產(chǎn)品。一些非常敏感的細(xì)胞系也許能從添加物中受益,，以避免細(xì)胞在解凍時(shí)凋亡,。無(wú)血清細(xì)胞凍存液，為多種保護(hù)劑組合,。青島無(wú)血清細(xì)胞凍存液服務(wù)電話

細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：1,、從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存，但為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,。在凍存前一日換一次培養(yǎng)液;2,、將凍存管放入液氮容器或從中取出時(shí)，要做好防護(hù)工作,，以免凍壞;3,、凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。4,、取細(xì)胞的過(guò)程中注意帶好防凍手套,，護(hù)目鏡,。此項(xiàng)特別重要，細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,，解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,，可導(dǎo)致炸列。凍存液產(chǎn)品針對(duì)細(xì)胞凍存的特殊配方,，能較大降低細(xì)胞在凍存過(guò)程中冰晶對(duì)于細(xì)胞的損傷,，有效提高細(xì)胞復(fù)蘇率和活力。青島無(wú)血清細(xì)胞凍存液服務(wù)電話一些保護(hù)劑,，易于穿透細(xì)胞,，避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞。

產(chǎn)品特性：a.可直接放置于-80℃冰箱,，無(wú)需降溫,，節(jié)省時(shí)間和精力,；b.即用型,，無(wú)需現(xiàn)配，操作方便,，可減少實(shí)驗(yàn)中因操作引起的污染,；c.在多種哺乳細(xì)胞系中經(jīng)過(guò)性能驗(yàn)證，其復(fù)蘇率和活率達(dá)90%以上,；d.可長(zhǎng)期存儲(chǔ)于-80℃冰箱(5年以上),，取用方便；e.采用成分明確的無(wú)血清配方,，價(jià)格比常規(guī)自配細(xì)胞凍存液更為低廉,；保存溫度：2~8℃具體操作步驟：1、培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中細(xì)胞按常規(guī)方法消化,，或分離獲得原代細(xì)胞后,，收集于離心管中。2,、使用離心機(jī)離心,，去除上清，收集細(xì)胞沉淀,。3,、根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)密度加入適量的細(xì)胞凍存液進(jìn)行重懸，充分混勻(推薦凍存密度為1-2×106/ml),。4,、將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中，直接放置于-80℃冰箱保存,。24小時(shí)后可移入液氮長(zhǎng)期保存(可選),。

細(xì)胞凍存時(shí)間和操作步驟：1,、首先我們需要凍存培養(yǎng)液，通常細(xì)胞凍存液含10%的DMSO,，或者是甘油,、10-20%的小牛血清；,、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,，并且還需要用PBS進(jìn)行清洗，需要注意在這里要丟棄掉舊的細(xì)胞凍存液,；3.去除PBS,，加入適量的胰蛋白酶，以覆蓋住培養(yǎng)皿表面為宜,，然后把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化掉,；然后離心1000rpm5min時(shí)間；4,、去除胰蛋白酶,，加入凍存培養(yǎng)液，輕輕吹打使細(xì)胞的分布變得均勻,，調(diào)節(jié)細(xì)胞較終的密度為5×106/ml-1×107/ml,，需要注意這是較佳的細(xì)胞密度；5,、將細(xì)胞裝入凍存管之中,，每管的含量應(yīng)該保持在1～1.5ml之間。在凍存管上標(biāo)明細(xì)名稱,、時(shí)間,、操作者；6,、較后要說(shuō)的就是細(xì)胞凍存的時(shí)間了,，對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序來(lái)說(shuō)，需要進(jìn)行梯度降溫,，降溫速率-1～-2℃/min,，一旦溫度達(dá)到-25℃以下時(shí)，那么就可增至-5℃～-10℃/min,；等到-100℃的時(shí)候,，可迅速的放入到液氮之中。無(wú)血清凍存液使用方法：將凍存管直接轉(zhuǎn)移至-80C水箱中冷凍保存,。

胞冷凍保存方法：選擇凍存處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率,。1.按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中。2.按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù),。（參考：5×105至5×106cells/ml）,。3.取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量,，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm,，4℃,，3~5min）。移去離心管中的上清液,。4.加入適量的無(wú)血清型細(xì)胞凍存液于離心管中,，使細(xì)胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻,，制成細(xì)胞混合液,。5.將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中。6.直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱,，長(zhǎng)期冷凍保存,。7.若研究者需要液氮保存時(shí)，可將完全凍結(jié)的凍存管（放入-80℃冰箱后至少一晝夜）移至-196℃液氮罐,。無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能：不含牛血清,，無(wú)動(dòng)物源組分。廈門正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液銷售廠家

細(xì)胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存,。青島無(wú)血清細(xì)胞凍存液服務(wù)電話

無(wú)血清細(xì)胞凍存液：產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：1.化學(xué)成分明確,，無(wú)任何外源蛋白和血清,，適用于各類動(dòng)物細(xì)胞株凍存,。2.無(wú)需程序降溫，細(xì)胞復(fù)蘇率90%以上,。3.凍存細(xì)胞可直接存放于-80℃冰箱,，穩(wěn)定保存數(shù)年。4.即用型產(chǎn)品,，4℃可穩(wěn)定保存,。細(xì)胞凍存：1.收集融合率>90%的對(duì)數(shù)期的貼壁細(xì)胞或者懸浮細(xì)胞于離心管中。2.1000rmp離心5分鐘,，去除離心管中的上清液,，收集細(xì)胞沉淀。3.加入適量細(xì)胞凍存液于離心管中,，使細(xì)胞濃度為1x106～1x107cells/mL,。頭輕柔吹打混勻,Z成細(xì)胞懸液。4.將離心管中的細(xì)胞懸液分裝與細(xì)胞凍存管中,，每管1mL或1.5mL,。5.將分裝好的細(xì)胞直接凍存于-80℃冰箱中，可穩(wěn)定凍存數(shù)年,。6.如若長(zhǎng)期保存,，可在次日轉(zhuǎn)移至液氮中,。青島無(wú)血清細(xì)胞凍存液服務(wù)電話