細(xì)胞凍存液的配制可選用10%的DMSO加上90%的小牛血清,,可以現(xiàn)用現(xiàn)配,。除了這個方式,,還可選擇20%的DMSO機(jī)上80%的小牛血清,配成兩倍的儲存液,,在使用時細(xì)胞懸液和凍存液按照1:1的比例混勻使用,,特別的方便。凍存液可直接置于-20攝氏度的環(huán)境中保存,。使用細(xì)胞凍存液需要注意以下幾點:1,、在使用凍存液前,需要確保細(xì)胞凍存液已經(jīng)完全融化,,并要輕輕的混勻,。對融化后的細(xì)胞凍存液要置于4℃的環(huán)境中保存。2,、使用凍存液之前應(yīng)該確保凍存前的細(xì)胞生長情況比較良好,,比如說細(xì)胞需要處于對數(shù)生長期,并且凍存的時候存活率大于90%,。3,、在使用細(xì)胞凍存液期間,為了保證可以發(fā)揮較佳的效果,,建議將細(xì)胞凍存在液氮之中,,這樣可以長時間的進(jìn)行保存。如果說將細(xì)胞置于-80℃的環(huán)境下保存,,那么保存的時間大約為1年,。細(xì)胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。上海無血清細(xì)胞凍存液價格
無血清細(xì)胞凍存液,,通用于人和各種動物細(xì)胞株,。特別配方(主要成分為DMSO和氨基酸)具有有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力。不含動物來源性蛋白,,能減少各類病毒,、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細(xì)胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存,,也適用于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存,。產(chǎn)品特色:不含動物源成分,病毒,、霉菌和支原體等污染可能性低,,各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。成分明確,,無批次差異,。可直接存放于-80℃冰箱凍存,,無需經(jīng)過費時的程序降溫過程(省時,、省力、省錢),。獨特配方有效提高細(xì)胞凍存存活率及復(fù)蘇率,。即用型,無需現(xiàn)配,,即開即用,。通用型,適用于凍存各種細(xì)胞系,,原代細(xì)胞,。可微量,,原位凍存,,例如雜交瘤細(xì)胞的凍存,省時高效,。存儲條件:儲存于4℃以下,質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起,,為期兩年。3個月以上沒有使用凍存液計劃時,,盡可能-20℃冷凍保存,。為避免重復(fù)凍融過程可能導(dǎo)致的凍存液品質(zhì)下降和性能降低,推薦將產(chǎn)品分裝成小管后,,再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存,。鄭州無血清細(xì)胞凍存液廠家推薦在凍存細(xì)胞時將細(xì)胞懸浮于凍存液中,可使冰點降低,,提高細(xì)胞膜對水的通透性,。
無血清細(xì)胞凍存液的操作規(guī)范:1、培養(yǎng)細(xì)胞至對數(shù)生長晚期,,顯微鏡觀察其外觀,、形態(tài),、有無污染等。選擇狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行凍存操作(注:貼壁生長細(xì)胞,,用胰蛋白酶消化并用完全培養(yǎng)基終止消化,進(jìn)行細(xì)胞計數(shù);懸浮生長細(xì)胞,,進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)),。2、500~1000g離心5min,,棄上清,。3、加入適量的細(xì)胞凍存液,,重懸細(xì)胞,,使細(xì)胞濃度達(dá)到1~10×106/ml,置于凍存管中密閉,。4,、采取逐級降溫保存:4℃放置20min,-20℃放置30min,,-70℃過夜,,置于液氮罐中長期存儲。注意:務(wù)必超凈工作臺內(nèi)無菌操作,,避免污染,。雜交瘤細(xì)胞凍存時應(yīng)定期復(fù)蘇,以檢查細(xì)胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性,。
胞冷凍保存方法:選擇凍存處于對數(shù)生長期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率,。1.按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中。2.按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計算所需凍存細(xì)胞數(shù),。(參考:5×105至5×106cells/ml),。3.取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量,置于離心管中,,離心收集培養(yǎng)細(xì)胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,,4℃,3~5min),。移去離心管中的上清液,。4.加入適量的無血清型細(xì)胞凍存液于離心管中,使細(xì)胞濃度為5×105至5×106cells/ml,。緩慢地混合均勻,,制成細(xì)胞混合液。5.將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中,。6.直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱,,長期冷凍保存,。7.若研究者需要液氮保存時,可將完全凍結(jié)的凍存管(放入-80℃冰箱后至少一晝夜)移至-196℃液氮罐,。無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢:可培養(yǎng)板整板凍存,,例如雜交瘤細(xì)胞凍存時可節(jié)省篩選過程。
無血清快速細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞復(fù)蘇方法:1,、從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管,,立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2,、待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后,,立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合,再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的試管中,,混合均勻,。3、離心收集培養(yǎng)細(xì)胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,,4℃,,3~5min),移去上清液,。4,、清洗細(xì)胞,充分洗凈殘留凍存液,。5,、加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基,使用移液管緩緩地均勻細(xì)胞混合液,。適量地稀釋后,,將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中。6,、鏡檢后,,研究者可根據(jù)各自方法和需要來進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢:因不含血清,,批次間差異小,。金華正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液廠家直銷
隨著細(xì)胞治好以及細(xì)胞儲存產(chǎn)業(yè)發(fā)展,細(xì)胞凍存也面臨從科研應(yīng)用走向產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)化,。上海無血清細(xì)胞凍存液價格
無血清細(xì)胞凍存液的使用方法及注意事項:1.將分裝好的細(xì)胞凍存管,,直接置于-80度冰箱過夜保存,次日投入液氮中保存即可備注:1,、凍存過程中,,第2步在冰袋附近操作時,低溫避免保護(hù)劑對細(xì)胞造成損傷,。2,、細(xì)胞凍存管一定要保證完全密封,,否則在復(fù)蘇過程中有可能會炸(1)提前開啟水浴鍋,溫度調(diào)節(jié)到37(2)將凍存的細(xì)胞冷凍管從液氮中取出,,迅速置于水浴鍋中融化,,盡量1min融化,時間越短,,對細(xì)胞影響越小,。(3)將融化后的含細(xì)胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充分混勻,(如細(xì)胞冷凍保存液為500ul,,則加入到5ml新鮮培養(yǎng)基中,如細(xì)胞冷凍保存液位1ml,,則加入10ml新鮮培養(yǎng)基中,。)(4)混勻后立即離心,800轉(zhuǎn),,3min即可離心結(jié)束后棄上清,,加入預(yù)溫的新鮮培養(yǎng)液。(5)混勻后分瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。(二氧化碳濃度根據(jù)培養(yǎng)基要求決定,,通常為5%【注意事項】細(xì)胞系凍存密度備注正常人成纖維細(xì)胞1~310cells/ml雜交瘤細(xì)胞1~310cells/ml某些hybridoma會因冷凍濃度太高而在解凍24小時后死去。上海無血清細(xì)胞凍存液價格