外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,,EVs),,其大小為30-150nm,具有雙層膜結構和茶托狀形態(tài),,含有豐富的內含物(包括核酸,、蛋白和脂質等),參與細胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,,如腦組織,、肌肉組織、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,,放入離心管中加上消化液進行消化,經(jīng)水浴,、反復輕輕上下顛倒,,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,,混勻,,置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程,,包括除雜,、濾膜過濾、超離等,。較后用PBS重懸外泌體,,用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定,。來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體,置于80℃儲存?zhèn)溆?。石家莊正規(guī)外泌體提取試劑直銷價
外泌體在肺病進程中的作用:肺病細胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進一些病癥的生長,。據(jù)相關報道稱,,LCC-exosome中的miR-210可以通過調節(jié)基質細胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進一些病癥血管的生成,;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過啟動脯氨酰羥化酶及壓制緊密結合蛋白ZO-1來促進肺病的生血管作用,。此外,有研究發(fā)現(xiàn),,外泌體中的內容物可以觸發(fā)上皮-間質轉化(EMT),。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達增加,促使人正常支氣管上皮細胞出現(xiàn)EMT,,從而使肺支氣管正常上皮細胞出現(xiàn)增殖,,遷移能力。色譜法,。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設備,應用不普遍,。深圳外泌體提取試劑直銷價如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,,產生難以去除的聚合物,。
外泌體可通過流式、WB(檢測指標有CD9,CD63,CD81),、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測,,普遍應用于藥物載體,、疾病診斷marker、精細醫(yī)療,、一些病癥治病等方面研究,。由于外泌體直徑小,樣本含量低,,提取十分困難,。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法,、免疫磁珠抗體捕獲,、商用試劑盒等。但到目前為止,,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量,、純度以及生物活性。外泌體是細胞間進行物質運輸和信息交流的重要工具,,可以通過調節(jié)免疫功能促進一些病癥的增殖,,血管新生和一些病癥轉移,。與細菌傳染,幫助細菌逃避免疫關系很大,,并與心血管疾病,,老年癡呆等疾病具有密切關系。
外泌體項目獲批學科方向:從統(tǒng)計來看,,與前年相似外泌體立項集中的領域還是一些病癥學,,近年來外泌體發(fā)表的文章也絕大部分與其在一些病癥的形成,耐藥性,,檢測等方面有關,。例如2019年發(fā)表在MolecularCancer(IF=10.679)上的文章表明外泌體FMR1-AS1通過TLR7/NFκB/c-My信號通路在女性食管ai中促進維持ai癥干細胞樣細胞的動態(tài)平衡。發(fā)表在JournalofExperimental&ClinicalCancerResearch(IF=5.646)上的一篇文章發(fā)現(xiàn)外泌體轉運p-STAT3可促進結直腸ai細胞獲得性5-FU耐藥性,。發(fā)表在Cancers(IF=6.162)上的一篇文章則研究了腹腔灌洗液中細胞外囊泡相關的miRNA作為子宮內膜ai分子標志物的可能性,。此外,在神經(jīng)系統(tǒng)和精神疾病,,中醫(yī)學及其他領域也有不少外泌體相關項目中標,。外泌體提取:尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子,。
外泌體研究的主要應用:外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈,、細胞遷移,、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面,。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,,從而導致大量新生血管的生成,促進了一些病癥的生長與侵襲,。一些病癥,。一些病癥轉移。來自白血病干細胞的外泌體促進急性骨髓性白血?。ˋML)細胞的增殖,、遷移和壓制細胞凋亡。治病靶標,。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D,,從而特異性高效靶向至胰腺病細胞,以明顯降低RAS活化,、病細胞增殖和轉移過程,。免疫。β細胞將含有蛋白質和miRNA的外泌體釋放到細胞外,并可轉移到其他代謝部位或免疫內皮細胞,,有利于維持葡萄糖體內平衡或造成胰島素抵抗,。心血管。外泌體介導miR-155從平滑肌細胞轉移到內皮細胞導致了內皮細胞的損傷促進動脈硬化,。分子標記,。疾病診斷。在酒精性肝病,、NASH,、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升,。預后標志,。外泌體的提取分離:超速離心法(差速離心)。蕪湖外泌體提取試劑銷售廠家
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外泌體的提取分離:1,、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,,大于一般蛋白質,,利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效,,且不影響外泌體的生物活性,是提取細胞外泌體的一種新方法,。2,、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63,、CD9蛋白),,用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,,即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,,難以普遍普及。石家莊正規(guī)外泌體提取試劑直銷價