密度過高會(huì)讓細(xì)胞沒有足夠的生存空間,，密度過低會(huì)讓細(xì)胞無(wú)法互相連接健康生長(zhǎng)。建議大家在細(xì)胞接種前,，一定要調(diào)整好適合細(xì)胞生長(zhǎng)的濃度，提高細(xì)胞的存活率,。溫度控制不達(dá)標(biāo)慢凍快融是細(xì)胞凍存復(fù)蘇的關(guān)鍵詞之一,。常規(guī)的凍存操作中，都會(huì)要求嚴(yán)格的梯度降溫,，常見的是-4℃→-20℃至-40℃→-80℃→液氮,，一定要避免溫度原因?qū)е录?xì)胞自取,；除非使用了成分經(jīng)過優(yōu)化,、經(jīng)過嚴(yán)格測(cè)試的凍存液，才能免去程序降溫這個(gè)繁瑣的步驟,。保存的時(shí)候也要保證整個(gè)細(xì)胞都是處于液氮的液面下方,，避免溫度對(duì)細(xì)胞存活的影響,。無(wú)血清凍存液使用方法：將加有凍存液的細(xì)胞懸液分裝至凍存管中。廈門天津無(wú)血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞凍存秘籍：細(xì)胞凍存對(duì)于大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞,，通常每分鐘下降-1至-3℃,。控制冷卻過程的較好方法是使用程序降溫系統(tǒng),。如果沒有程序降溫系統(tǒng),，可以使用程序降溫盒，然后將其置于-70℃至-90℃冰箱中過夜,。雖然這種方法適用于許多細(xì)胞系,，但不能提供可控的，均勻的或可重復(fù)的冷卻,，不建議用于珍貴細(xì)胞,。無(wú)論使用哪種冷卻方法，重要的是快速高效地將其傳輸?shù)捷^終存儲(chǔ)位置,。如果轉(zhuǎn)移不能立即完成,，可以將小瓶置于干冰上一段時(shí)間。這樣可以避免在轉(zhuǎn)移過程中發(fā)生溫度升高而損害細(xì)胞,。在這個(gè)轉(zhuǎn)移過程中溫度升高是解凍后影響細(xì)胞活力的主要原因,。上海正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能：既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存，也適用于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存,。

細(xì)胞冷凍的原理：細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷,。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外,，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購(gòu)買,、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞,。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下,，細(xì)胞內(nèi)水分透出,，減少了冰晶形成，從而避免細(xì)胞損傷,。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活,。

細(xì)胞凍存：取出凍存管，注明細(xì)胞名稱,，代數(shù),，日期。離心后,，以無(wú)菌吸管吸棄上清,，不要吸到底部的細(xì)胞沉淀。將細(xì)胞沉淀與凍存液充分混勻,，根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果,，將細(xì)胞總數(shù)調(diào)節(jié)成細(xì)胞數(shù)量為5-10*105/ml為宜。將細(xì)胞凍存懸液分裝進(jìn)細(xì)胞凍存管中,，一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜,。嚴(yán)密封口后，使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,，使溫度每分鐘大約降低1℃,。或者,，將裝有細(xì)胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中,，然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜。若無(wú)凍存盒及其他凍存裝置,，可以先將凍存管置于4℃30min,，再-20℃凍存1h直至完全冷凍，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜,。第二天將已經(jīng)冷凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮容器中,，置于液氮上方的氣相空間中儲(chǔ)存1000 rmp離心5分鐘，去除離心管中的上清液,，收集細(xì)胞沉淀,。

無(wú)血清凍存液通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株（tumour細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞），凍存細(xì)胞可在-80℃長(zhǎng)期保存（>5年）,。配方成分明確,，不含動(dòng)物來源性蛋白,，不含血清，可減少各類細(xì)菌,、病毒和支原體等污染,，保證凍存細(xì)胞的安全。該凍存液含DMSO,、葡萄糖等各種細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)成分,，提高細(xì)胞存活率和活力，亦適合于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞,。該產(chǎn)品添加了細(xì)胞沉降穩(wěn)定劑,，可延緩細(xì)胞在凍存過程中的沉降速率，防止細(xì)胞互相擠壓,，影響細(xì)胞凍存效果,。另外，添加了細(xì)胞膜保護(hù)劑,、滲透性細(xì)胞膜內(nèi)保護(hù)劑,、非滲透性細(xì)胞保護(hù)劑等多種冷凍保護(hù)劑，這些成分在溶液中同水分子結(jié)合,，發(fā)生水合作用,，弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而少冰晶的形成，能較大降低細(xì)胞在凍存過程中冰晶對(duì)于細(xì)胞的損傷,，有效提高細(xì)胞復(fù)蘇存活率,。該產(chǎn)品配方成分明確，不含血清,、不含動(dòng)物源性蛋白,，可減少各類細(xì)菌、病毒和支原體等污染,，保證凍存細(xì)胞的安全,；不光適用于常規(guī)細(xì)胞系、原代細(xì)胞,，同時(shí)亦適合于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞,。避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞。廈門天津無(wú)血清細(xì)胞凍存液

需液氮凍存,，且不能原位（如孔板）凍存,。廈門天津無(wú)血清細(xì)胞凍存液

以前在另一家實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候，凍存細(xì)胞根本就沒有講究這些標(biāo)準(zhǔn)操作,。凍存的細(xì)胞有293T,、PT67、C2C12,、MEF(鼠胚胎成纖維細(xì)胞）,、HelaS3,、HelaD、U2OS,、HKC,、RK3E、ECO,、H292,、HSY,、COS7,、SupT1等。將細(xì)胞酶消化后直接參與離心,，加入凍存液（含90%的血清和10%的DMS0),，直接放在-80℃冰箱。兩三天后移入液氮中,，較久保存,，幾年后細(xì)胞的活力仍沒有什么受損，照常能復(fù)蘇,，成活率高,。但有三點(diǎn)須注意：（1）一是細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)要好，不能長(zhǎng)得過稀,，同樣也不能過密,，細(xì)胞的狀態(tài)看起來相當(dāng)健康。70%密度的要保存的細(xì)胞須再長(zhǎng)24h才能全滿,，萬(wàn)一細(xì)胞狀態(tài)不好,，可以酶消化后再繁殖一次；（2）凍存細(xì)胞的量要留心,，不能太密也不能太稀,，一般1OOmm培養(yǎng)皿的細(xì)胞凍存為3~4管；（3）存放在-80℃冰箱的時(shí)間不能過長(zhǎng),，一兩天后轉(zhuǎn)移到液氮罐里,。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細(xì)胞，半年還有30%~50%的細(xì)胞有活性,，但一年的細(xì)胞就沒有活的,。廈門天津無(wú)血清細(xì)胞凍存液