拭子RNA提取試劑的選擇?應(yīng)有較高的提取得率,。對(duì)離心柱法而言,,拭子核酸得率的高低,主要取決于離心柱對(duì)核酸的吸附能力,、洗脫能力以及裂解液的裂解消化能力。離心柱的硅膠膜RNA吸附性能好,、裂解液細(xì)胞裂解能力強(qiáng),、洗脫液洗脫能力好,核酸的提取得率就高,。反之,,如果離心柱硅膠膜吸附能力不好,裂解液和洗脫液沒有經(jīng)過很好的優(yōu)化,,RNA的提取得率就不高,。至于RNA提取得率的確定,我們可以使用紫外分光光度法,,但是不能作為判斷得率的單獨(dú)標(biāo)準(zhǔn),,較好還是要做個(gè)PCR或熒光定量。細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):提取的RNA,,品質(zhì)高,,產(chǎn)量多。長沙RNA提取試劑生產(chǎn)廠家
提取RNA的詳細(xì)步驟:首先,,將研缽晾干夠,,倒入1/3體積的液氮,加入0.2g均質(zhì)的植物材料,,充分研磨后轉(zhuǎn)入一個(gè)含有300微升GMT的1.5ml的離心管中,,搖勻。然后,,加入30微升2mol/lNaAc進(jìn)行搖勻,,加入300微升酸酚搖勻,加入100微升的氯仿?lián)u勻,。然后,,在四攝氏度12000r/min下離心二十分鐘,,吸取上清液的3/4,加入等體積的異丙醇,,于冰上放置十五分鐘,。然后,在四攝氏度12000r/min下離心十分鐘,,將沉淀懸浮于含100微升的4mol/lLiCl小試管中,,于-20攝氏度下放置過夜。然后,,在4攝氏度13000r/min下離心10-15min,,將沉淀溶于0.4mlDEPC處理水中,加入1/2體積氯仿和1/2體積酸酚,,搖勻,,進(jìn)行抽提,在4攝氏度13000r/min下離心五分鐘,。將上清液中加入等體積的氯仿?lián)u勻,,進(jìn)行抽提,在四攝氏度13000r/min下離心五分鐘,,上清液中加入1/10體積3mol/lNaAc和兩倍體積的午睡乙醇與-20攝氏度放置一小時(shí),。長沙RNA提取試劑生產(chǎn)廠家RNA提取試劑注意事項(xiàng):硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細(xì)胞和組織中提取總RNA的試劑。
動(dòng)物組織總RNA提?。?,、盡量選取新鮮的組織,如果不是新鮮的(較好在三個(gè)月之內(nèi)-80℃冰箱或者在液氮中凍存的,。在剪取組織時(shí),,不要拿到室溫直接剪取,一定要放到冰盒上,,盡量避免反復(fù)凍融,。2、用干凈的剪刀鑷子剪取一小塊組織,,剪取樣本時(shí)盡量剪組織中心的部位,,或者先將大塊的組織先從中間切開,然后再在新鮮切口的位置剪取樣本,。取下的組織要充分的剪碎,,將剪碎的組織放到無RNA酶的EP管中,加入裂解液,,剪碎的組織要充分接觸裂解液,,準(zhǔn)備勻漿。3,、正常組織選取綠豆粒大?。?0~60mg)的組織進(jìn)行勻漿,,如果組織中含有大量的蛋白、脂肪或者是緊密的纖維組織比如肝臟等,,適當(dāng)增減剪取組織的量(可選10~20mg),。4、如果提取的是魚肌肉,,蝦肉,,海蜇等含水分較多的組織時(shí)則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量用量(推薦100~200mg)。5,、條件允許的情況下,,動(dòng)物組織使用高通道組織勻漿機(jī)勻漿后即可直接進(jìn)行提取步驟,如沒有該設(shè)備,。6,、較后提取后得到的RNA一定要立即放到冰盒上,以減少RNA的降解,。
拭子RNA提取試劑的選擇,?操作簡(jiǎn)便性。操作簡(jiǎn)便性也是拭子RNA提取試劑選擇的一個(gè)重要因素,。操作過于復(fù)雜,不光費(fèi)時(shí)費(fèi)力,,還容易導(dǎo)致樣本間的交叉污染,,也容易損失樣本。特別是用于臨床檢測(cè)或樣本量較多情況下的檢測(cè),,操作復(fù)雜如果導(dǎo)致交叉污染會(huì)引起誤診,,還會(huì)影響出檢測(cè)報(bào)告的時(shí)間。因而,,選用操作簡(jiǎn)便,、流暢的提取試劑盒非常重要。就我們?cè)?jīng)用過的以上三種提取試劑盒來說,,Q公司的拭子RNA提取試劑盒提取過程大約25min,,從樣本處理開始需要10個(gè)步驟;T公司拭子RNA提取試劑盒整個(gè)提取過程需要1個(gè)多小時(shí),,從樣本開始處理10個(gè)步驟,;B公司的Biog拭子RNA提取試劑盒提取過程大約20min,從樣本開始處理7個(gè)步驟,,B公司的拭子RNA提取試劑盒在操作簡(jiǎn)便性上具有一定優(yōu)勢(shì),,更適合于較多樣本的檢測(cè)。據(jù)了解,,該產(chǎn)品已通過藥監(jiān)局備案,,也更適合臨床樣本的檢測(cè),。植物花總RNA提取試劑盒:可以從多糖多酚植物的根、莖,、葉以及花組織中快速提取總RNA,。
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒自主研發(fā)生產(chǎn),博取眾家之長,,根據(jù)多年來市場(chǎng)反饋不斷進(jìn)行技術(shù)升級(jí)和改良得來,。具有操作步驟少,實(shí)驗(yàn)快捷,,RNA產(chǎn)量純度高,,充分滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求的需要,適用提取樣品普遍等特點(diǎn),。產(chǎn)量:每100mg樣品提取的RNA平均值在20-50ug不等,。純度:OD值一般在1.9以上。得到的RNA無DNA污染,,可直接用于反轉(zhuǎn)錄,,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(尤其對(duì)RNA溶液中DNA非常敏感)等所有后續(xù)實(shí)驗(yàn)。1,、快速:多糖多酚植物RNA提取試劑盒提取RNA的整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作步驟簡(jiǎn)化快捷從時(shí)間因素考量上較大限度的防止RNA在提取中的降解(一般樣品十多分鐘就能完一個(gè)樣RNA的提取,,較大縮短了一般試劑盒提取所需要的半小時(shí)甚至更長的時(shí)間,),。2,、高產(chǎn)量:多糖多酚植物RNA提取試劑盒擁有較強(qiáng)細(xì)胞裂解液,保證后續(xù)RNA提取的得率,。(能完全通過化學(xué)方法徹底裂解細(xì)胞讓RNA釋放完整,,并且有效成分能壓制內(nèi)源RNA酶的降解作用)總RNA提取試劑:適用于植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA,。長沙RNA提取試劑服務(wù)電話
口罩愛帶不帶,,做實(shí)驗(yàn)時(shí)高冷一點(diǎn),不要指點(diǎn)江山,,唾沫橫飛即可,。長沙RNA提取試劑生產(chǎn)廠家
拭子RNA提取試劑的選擇?1,、產(chǎn)品價(jià)格,。價(jià)格也是選購產(chǎn)品的重要考量因素。對(duì)于絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)如Northern雜交,、RT-PCR,、RealTimeRT-PCR、cDNA文庫構(gòu)建等,國產(chǎn)試劑盒都能滿足質(zhì)量要求,。與國外有名品牌相比,,國產(chǎn)試劑盒的價(jià)格較為便宜,價(jià)格還不到國外品牌價(jià)格的30%,,性價(jià)比較高,。因而,對(duì)于以上實(shí)驗(yàn)建議選用國產(chǎn)試劑盒,。一些經(jīng)費(fèi)不是很多的課題研究或樣本量較大的臨床檢測(cè)項(xiàng)目,,特別適合選用國產(chǎn)試劑盒。2,、與國外有名品牌相比,,國產(chǎn)試劑盒在拭子RNA提取純度上略有不足,但不影響大多數(shù)實(shí)驗(yàn),,特別是下游需要PCR擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)和分子雜交類實(shí)驗(yàn),。在提取得率上,國內(nèi)試劑盒與國外品牌差別不大,,而在價(jià)格方面,,國產(chǎn)試劑盒具有比較明顯的優(yōu)勢(shì)。如果經(jīng)費(fèi)充足,,RNA純度要求特別高,,可考慮選擇Q等國外有名品牌。如果經(jīng)費(fèi)不多或下游主要做PCR或分子雜交等實(shí)驗(yàn),,可考慮選擇性價(jià)比較高的國產(chǎn)品牌,。長沙RNA提取試劑生產(chǎn)廠家