生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,,采用酸法與酶法相結合的工藝,保持恒低溫無菌的環(huán)境,,利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心,,簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,,并采用檸檬酸替代醋酸進行提純,。從提取原料到樣品生成過程中,進行多次真空冷凍干燥,,并經進一步處理獲得含水率在3%以下的膠原蛋白微粉,;較后由滅菌、無菌包裝,,成品膠原蛋白粉末的純度在98%以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,,提高了產率和生物相容性,降低了成本,,適用于生物醫(yī)用材料,,所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結構。它是研究成纖維細胞與細胞外基質之間以及細胞之間相互作用的良好模型,。深圳正規(guī)鼠尾膠原單價
鼠尾Ⅰ型膠原:組裝液的配置:1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL,,用1mol/L氫氧化鈉調節(jié)酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中,,倒入0.5mL自組裝液,,室溫放置20min。予自組裝液自組裝24h,。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養(yǎng)皿中,,將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經去離子水,、50%乙醇,、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中,,滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL,;滴加1mol/L的氯化氫,調節(jié)酸堿度至7.4,,然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉),,約16滴/min。深圳鼠尾膠原廠家現貨整個操作請于冰上進行,,因室溫下鼠尾膠原I可迅速成膠,。
含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞,,并放置于冰浴中,。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),,立即混勻,。再加入23ul10xPBS或10x培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH為7左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,,加入適當體積的細胞培養(yǎng)液,,轉移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
膠原蛋白的適用征狀:1、由于工作勞累,,睡眠不足形成的皮膚晦暗無光,、發(fā)黃、皮膚彈性差等皮膚衰老的不良癥狀,。2,、由于年齡、太陽輻射因素引起的皮膚松弛,、下垂,、皺紋、干燥等皮膚衰老現象,。3,、由于體內異常黑色素分泌旺盛,大量沉積皮膚表面,,肌膚不能及時代謝出異常黑色素,,形成各種色斑。4,、由于長期戶外活動及皮膚保養(yǎng)不當使膚質受到損傷,,過早出現細紋,皮膚干燥、脫皮,、,、毛孔粗大等不良癥狀。5,、由于內分泌功能紊亂,,皮膚膚質差、皮膚發(fā)油,、發(fā)暗,,易長青春痘留下的色印、色素沉著等,。6,、由于生活無規(guī)律,吸煙等因素,造成的黑眼圈,眼袋等問題。7.長期電腦旁工作,,電腦輻射造成脫發(fā),,內分泌紊亂問題。鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,,它具有促進體外培養(yǎng)細胞(特別是上皮細胞)貼壁的作用,。
鼠尾膠原實驗應用:鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細胞中的應用。目的:建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果,。結果:自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞,,細胞角蛋白18表達陽性,免疫組織化學結果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征,。結論:成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,,并且制作簡便,成本低廉。建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中,,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。南昌正規(guī)鼠尾膠原廠家現貨
自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞,細胞角蛋白18表達陽性,。深圳正規(guī)鼠尾膠原單價
服用膠原蛋白的注意事項:1,、大分子膠原蛋白進入人體后需要降解為小分子肽、氨基酸才能被人體吸收,,真正有效吸收的成分并不多,。2、這些食物多半脂肪含量較高,,不適合經常食用,。高熱量、高脂肪,,尤其是油炸食物都容易產生自由基,,加速老化。如果能少吃這一類食物,,就等于減少了身體被自由基傷害的機會及皮膚出現黑斑,、皺紋等的風險。3,、孕婦是不能服用膠原蛋白產品,,因膠原蛋白是19種氨基酸組成的,其中有幾種是不能被胎兒吸收的,,容易引起第二特征過早的發(fā)育和成熟,,不利于出生后的嬰兒成長和發(fā)育。深圳正規(guī)鼠尾膠原單價