外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法,,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,,但是純度不足,,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),,也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心,這種操作簡(jiǎn)單,、省時(shí),,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題,。三是密度梯度離心法,,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,,耗時(shí),,量少。,、在超速離心力作用下,,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法,。濟(jì)南外泌體提取試劑單價(jià)
用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng):1,、選擇血清還是血漿?推薦大多數(shù)研究選擇血漿,。血液凝固過程中血小板會(huì)產(chǎn)生大量外泌體,,含量占血清中外泌體的50%以上,選擇血漿可避免不必要的影響,。2,、注意抗凝劑的選擇。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關(guān),,這可能是因?yàn)楦嗡嘏c引物和/或酶有競(jìng)爭(zhēng)作用,。除了克制PCR,,肝素可以與外泌體結(jié)合,阻止細(xì)胞攝取外泌體,。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本,。EDTA和雙嘧達(dá)莫(CTAD),CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體,。EDTA可能會(huì)干擾PCR反應(yīng)(盡管其程度小于肝素),,但是還是優(yōu)于其他選擇。此外,,有研究表明鈣螯合劑可在體外促進(jìn)外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA,、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量。使用肝素時(shí)這種影響就不會(huì)發(fā)生,,因此建議在測(cè)量外泌體的精確數(shù)量時(shí)選用肝素,。但是也有研究表明肝素可以導(dǎo)致體外條件下外泌體的減少??傊?,目前尚需要更多的研究論證抗凝劑是否及如何對(duì)外泌體的釋放,作用和下游反應(yīng)產(chǎn)生特異性影響,。武漢正規(guī)外泌體提取試劑直銷價(jià)早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集細(xì)菌,,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān),。
外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等。關(guān)于外泌體的提取有超速離心,、試劑盒,、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,,然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,,由于離心步驟繁瑣,,費(fèi)事費(fèi)力,而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染,,且損耗量大,,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定。而且對(duì)于抽提細(xì)胞上清來說,,更是極為不請(qǐng)便,,試想用提取300ml的上清需要6個(gè)50ml離心管,無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,,都具有操作極其不便的缺點(diǎn),,總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會(huì)堵塞膜孔,造成濃縮效率低,,濃縮管重復(fù)利用差,,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會(huì)粘連成團(tuán),造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,,對(duì)于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響
外泌體(exosome)是所有細(xì)胞釋放出的菌類大小的顆粒,。它們天然地存在于血液中。根據(jù)來自美國(guó)德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心的一項(xiàng)新的研究,,對(duì)外泌體進(jìn)行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法,。論文通信作者為德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)系研究員RaghuKalluri博士。在這項(xiàng)新的研究中,,經(jīng)過基因修飾的外泌體(被稱作iExosome)能夠運(yùn)送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,,從而導(dǎo)致胰腺病模式小鼠病情緩解,增加它們的總存活率,。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾(RNAi)的靶向方法:利用這些天然的納米顆粒(即外泌體)運(yùn)送小干擾RNA(siRNA)或短發(fā)夾RNA(shRNA)分子來靶向胰腺病細(xì)胞中的KRAS突變基因,,從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負(fù)荷和存活。他們證實(shí)外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,,這是因?yàn)檫@些納米大小的囊泡(即外泌體)輕松地在體內(nèi)遷移和進(jìn)入靶細(xì)胞(包括病細(xì)胞)中,。外泌體在免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長(zhǎng)與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用,。外泌體提取:磁珠法具有特異性高,、操作簡(jiǎn)便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)。
研究初次發(fā)現(xiàn)瘧原蟲傳染小鼠血漿外泌體(exosomes)能夠壓制一些病癥血管生成,,并初步闡明其分子機(jī)制,。研究加深了對(duì)瘧原蟲傳染宿主所分泌的外泌體與一些病癥血管生成之間的相互作用的認(rèn)識(shí),為開發(fā)瘧原蟲傳染來源的外泌體作為一種新型抗一些病癥制劑奠定了基礎(chǔ),。研究人員選用肺病小鼠模型作為研究對(duì)象,,從傳染瘧原蟲的小鼠血漿中獲得外泌體,并將這些外泌體注射到小鼠的一些病癥內(nèi)部,,并與沒有瘧原蟲傳染的小鼠血漿外泌體進(jìn)行對(duì)照,。研究發(fā)現(xiàn),瘧原蟲傳染小鼠的血漿外泌體明顯壓制一些病癥血管的生成,。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),,瘧原蟲傳染的小鼠血漿外泌體通過至少四種特殊的微小RNA(miR16-5p/17-5p/322-5p/497-5p)壓制血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF受體(VEGFR2)的表達(dá)從而阻斷血管生成的信號(hào)通路。這些發(fā)現(xiàn)加深了人們對(duì)瘧原蟲抗病機(jī)理的理解,并為瘧原蟲療法治病一些疾病的臨床研究提供進(jìn)一步的理論依據(jù),。外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì):無需蛋白酶處理,。武漢外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨
利用不同截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離,便可獲得外泌體,。濟(jì)南外泌體提取試劑單價(jià)
外泌體與免疫系統(tǒng):不同的細(xì)胞來源的外泌體,,包括免疫細(xì)胞(B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞)、病細(xì)胞,、上皮細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞,,釋放出帶有載體的外泌體,可影響先天免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中受體細(xì)胞的增殖和各自的活性,。CD4+和CD8+T細(xì)胞可直接或間接地受到外泌體的影響,,刺激或壓制其增殖和功能。外泌體與代謝性和心血管疾?。和饷隗w可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過程中起作用,。體外培養(yǎng)心血管疾病的細(xì)胞收集的外泌體與疾病相關(guān)的代謝適應(yīng)有關(guān);體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞的外泌體具有保護(hù)心血管的作用,。這些發(fā)現(xiàn)表明不同來源的外泌體可以通過傳遞miRNA,,蛋白等物質(zhì)改變受體細(xì)胞的代謝狀態(tài)。外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷濟(jì)南外泌體提取試劑單價(jià)