外泌體(exosomes,，Exos)是細(xì)胞分泌的一種膜囊泡，因其可以將供體細(xì)胞的信息通過其攜帶的蛋白質(zhì),、mRNA,、miRNA等傳遞到受體細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞之間的信息交流及物質(zhì)交換,，并且可以作為藥物載體轉(zhuǎn)運(yùn)藥物而引起科學(xué)家的普遍關(guān)注(Fig1),。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨(dú)特的優(yōu)勢，表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,，使其可以穿透許多生物膜,，提高藥物的運(yùn)輸效率和靶向性，可以穩(wěn)定存在于血液中,，納米級尺寸明顯增強(qiáng)藥物在瘤部位的滲透滯留效應(yīng)(permeabilityandretentioneffect,EPR),。目前，許多抗藥物,、基因藥物及藥物均被成功載入外泌體,。但是由于沒有較好的外泌體分離純化和載藥的方法，使得其作為藥物載體的應(yīng)用受到限制,。離心除去細(xì)胞器,，留取上清。昆明外泌體提取試劑哪里買

外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,，但是純度不足,，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心,，這種操作簡單,、省時(shí),，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題,。三是密度梯度離心法,，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,，耗時(shí),，量少。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷,。成都正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集細(xì)菌,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。

外泌體鑒定：外泌體分離之后,，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,，多角度進(jìn)行鑒定,。l透射電鏡鑒定法：簡稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。l納米顆粒追蹤分析法：簡稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測：外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,，如CD9,、CD63和CD81；細(xì)胞質(zhì)蛋白,，如肌動(dòng)蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）,；

外泌體（exosome），特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。現(xiàn)已證實(shí)可以分泌外泌體的細(xì)胞有：肥大細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞,、樹突狀細(xì)胞,、瘤細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等,。外泌體在免疫中抗原呈遞,、瘤的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用,。同時(shí),，不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì),、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,，包括外泌體、微泡和凋亡小體,。其中,，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細(xì)胞分泌,，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì)、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子。逐漸取代超速離心法并推廣開來,。有些試劑盒操作簡便,，不用超速離心。

外泌體與肺病預(yù)后：外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子,。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn),，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外,，還有研究表明,，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時(shí)發(fā)現(xiàn),，NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標(biāo)志物,。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA，其中l(wèi)et-7f,、miR-30e-3p和miR-20b表達(dá)均下調(diào),，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者，高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān),。近幾年來,，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒。成都正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦

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外泌體的提取、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法,；尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論,，較初是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù)。該方法的主要優(yōu)點(diǎn)是不需要很大的離心力,，從而保證了外泌體的完整性,。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白，結(jié)果顯示,，后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供了可能,。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法,，超濾一般被認(rèn)為是外泌體分離過程中的一個(gè)準(zhǔn)備過程，通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質(zhì),。不過連續(xù)的超濾可以分離出外泌體,，和超高速離心相比，超濾不需要特殊的設(shè)備就可以較短時(shí)間內(nèi)分離出外泌體,。但是,，超濾膜對外泌體的黏附作用會降低外泌體的產(chǎn)量，并且超濾過程中施加的外力可能會使外泌體變形或者破裂,。昆明外泌體提取試劑哪里買