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外泌體,,是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),,直徑大約40-100nm,。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物,。然而較近幾年,,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸,,能作為信號(hào)分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能,。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對(duì)細(xì)胞分泌膜泡的興趣。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,,如免疫中抗原呈遞,、一些病癥的生長(zhǎng)與遷移、組織損傷的修復(fù)等,。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。色譜法,。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不普遍,。上海正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價(jià)
外泌體鑒定:外泌體分離之后,,需要經(jīng)過(guò)一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,,多角度進(jìn)行鑒定,。l透射電鏡鑒定法:簡(jiǎn)稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。l納米顆粒追蹤分析法:簡(jiǎn)稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測(cè)速度快,,檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測(cè):外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,,如CD9,、CD63和CD81;細(xì)胞質(zhì)蛋白,,如肌動(dòng)蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins),;使用可截留100KD分子量的膜,通過(guò)離心截留上清中的外泌體,截留完成后上海外泌體提取試劑供應(yīng)商由于這些核酸被囊膜包裹而被保護(hù),,穩(wěn)定性高,,不易降解,。
近年來(lái),,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及一些病癥治病領(lǐng)域,、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲(chóng)領(lǐng)域;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。外泌體來(lái)源及內(nèi)含物。幾乎所有類型的細(xì)胞都可以分泌外泌體,,同時(shí)外泌體也普遍存在于體液中,,包括血液、眼淚,、尿液,、唾液、乳汁,、腹水等,。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸(microRNA、lncRNA,、circRNA,、mRNA、tRNA等),、蛋白,、膽固醇等。外泌體的表面marker主要有CD63,、CD81,、CD9、TSG101,、HSP27等,。外泌體鑒定。目前對(duì)于外泌體的鑒定主要有四種方法:透射電子顯微鏡(TEM),、Nanosight,、WesternBlot、流式細(xì)胞術(shù),。
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,,直徑約為30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),,天然存在于血液、尿液,、唾液,、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞,、干細(xì)胞),都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,,Exosome可通過(guò)細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA,、miRNA、lncRNA,、circRNA,,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答,、炎癥反應(yīng)、血管生成,、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過(guò)程發(fā)揮關(guān)鍵作用,不同細(xì)胞來(lái)源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病近年來(lái),隨著人們對(duì)外泌體的研究和認(rèn)識(shí)加深,。
外泌體可通過(guò)流式,、WB(檢測(cè)指標(biāo)有CD9,CD63,CD81)、電鏡觀察,、NTA粒徑追蹤等手段檢測(cè),,普遍應(yīng)用于藥物載體、疾病診斷marker,、精細(xì)醫(yī)療,、一些病癥治病等方面研究。由于外泌體直徑小,,樣本含量低,,提取十分困難,。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法,、免疫磁珠抗體捕獲,、商用試劑盒等。但到目前為止,,仍沒(méi)有一種提取方法能同時(shí)保證外泌體的含量,、純度以及生物活性。外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸和信息交流的重要工具,,可以通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)一些病癥的增殖,,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移,。與細(xì)菌傳染,,幫助細(xì)菌逃避免疫關(guān)系很大,并與心血管疾病,,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系外泌體提?。壕垡叶迹≒EG)為常用的多聚物,可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,。上海外泌體提取試劑供應(yīng)商
外泌體提?。盒》肿涌蛇M(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞,在柱中受到更強(qiáng)地滯留,,更慢地被洗脫出,。上海正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價(jià)
研究表明被特定部位的細(xì)胞獲取的一些病癥外泌體可為一些病癥的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的一些病癥細(xì)胞來(lái)源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的一些病癥細(xì)胞重新定向,。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的一些病癥細(xì)胞來(lái)源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達(dá)譜,,整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān),而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān),。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細(xì)胞獲取,,進(jìn)而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細(xì)胞獲取后啟動(dòng)了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達(dá),。較后通過(guò)臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測(cè)一些病癥轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo),。上海正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價(jià)