Exosome,中文名外泌體,,是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),,直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),,但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而較近幾年,,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸,,能作為信號(hào)分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對(duì)細(xì)胞分泌膜泡的興趣,。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,,如免疫中抗原呈遞,、一些病癥的生長(zhǎng)與遷移,、組織損傷的修復(fù)等,。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),,能很好的保護(hù)其包被的物質(zhì),,且能靶向特定細(xì)胞或組織,因此是一種很好靶向給藥系統(tǒng)(targeteddeliverysystem),。用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng):避免劇烈搖晃,。鄭州外泌體提取試劑推薦廠家
用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng):1,、選擇血清還是血漿,?推薦大多數(shù)研究選擇血漿,。血液凝固過(guò)程中血小板會(huì)產(chǎn)生大量外泌體,含量占血清中外泌體的50%以上,,選擇血漿可避免不必要的影響,。2、注意抗凝劑的選擇,。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關(guān),這可能是因?yàn)楦嗡嘏c引物和/或酶有競(jìng)爭(zhēng)作用,。除了克制PCR,,肝素可以與外泌體結(jié)合,,阻止細(xì)胞攝取外泌體,。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本,。EDTA和雙嘧達(dá)莫(CTAD),,CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體。EDTA可能會(huì)干擾PCR反應(yīng)(盡管其程度小于肝素),,但是還是優(yōu)于其他選擇,。此外,,有研究表明鈣螯合劑可在體外促進(jìn)外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量,。使用肝素時(shí)這種影響就不會(huì)發(fā)生,,因此建議在測(cè)量外泌體的精確數(shù)量時(shí)選用肝素,。但是也有研究表明肝素可以導(dǎo)致體外條件下外泌體的減少??傊?,目前尚需要更多的研究論證抗凝劑是否及如何對(duì)外泌體的釋放,,作用和下游反應(yīng)產(chǎn)生特異性影響,。珠海外泌體提取試劑哪家好外泌體提?。撼瑸V膜也可用于分離外泌體,。
為了分離外泌體,,研究人員用兩個(gè)這樣的單元串聯(lián)構(gòu)建了一個(gè)裝置,。首先,,使用聲波從血液樣品中除去細(xì)胞和血小板,。一旦細(xì)胞和血小板被去除,,樣品進(jìn)入第二個(gè)微流體單元,,然后使用較高頻率的聲波將外泌體與稍大的細(xì)胞外囊泡分開(kāi),。這項(xiàng)工作的通訊作者之一,,麻省理工學(xué)院材料科學(xué)與工程系科學(xué)家MingDao博士說(shuō):“聲波更溫和,。而且在分離時(shí),這些囊泡受處理的時(shí)間只有1秒鐘或更短,。這是一個(gè)很大的優(yōu)勢(shì),?!笔褂迷撛O(shè)備,,處理100微升未稀釋血液樣本只需要不到25分鐘,?!斑@種新技術(shù)可以解決當(dāng)前外泌體分離技術(shù)的缺點(diǎn),,如周期長(zhǎng),,一致性差,,產(chǎn)量低,污染以及完整性受損等,。我們想要把提取高質(zhì)量的外泌體的過(guò)程簡(jiǎn)化為按一個(gè)按鈕就在10分鐘內(nèi)獲得所需樣品一樣簡(jiǎn)單,?!毖芯咳藛T們說(shuō),。
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,,直徑約為30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,,具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),,天然存在于血液,、尿液、唾液,、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中,。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞,、干細(xì)胞),,都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,,Exosome可通過(guò)細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA,、miRNA、lncRNA,、circRNA,,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答,、炎癥反應(yīng)、血管生成,、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過(guò)程發(fā)揮關(guān)鍵作用,不同細(xì)胞來(lái)源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病外泌體的提取、分離方法:開(kāi)發(fā)高效,、快速,、穩(wěn)定,并且保持外泌體結(jié)構(gòu)和生物功能完整性的方法,。
外泌體研究思路,。外泌體研究通常與高通量測(cè)序的聯(lián)系緊密,研究思路可以分為三大類:表達(dá)譜,、分子標(biāo)志物和分子機(jī)制方向,,其中表達(dá)譜思路的特點(diǎn)就是短平快、通常以測(cè)序數(shù)據(jù)為主要內(nèi)容,,短平快發(fā)表3-5分文章,。而分子標(biāo)志物的特點(diǎn)是在表達(dá)譜基礎(chǔ)之上加入大量樣本驗(yàn)證,建立ROC,、KM曲線,,分析分子與臨床疾病的相關(guān)性為主,,通常文章影響因子在3-10分之間。分子機(jī)制研究,,顧名思義要做到細(xì)胞功能,、機(jī)制研究深度,因此工作量通常較大,,影響因子通常能夠上10+,。唐山正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移,、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過(guò)程,,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。由于這些核酸被囊膜包裹而被保護(hù),,穩(wěn)定性高,,不易降解。上海正規(guī)外泌體提取試劑直銷廠家
聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,。鄭州外泌體提取試劑推薦廠家
外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì):純化和富集的完整血漿/血清,,尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體的可用于功能研究;樣本輸入量多樣,;無(wú)需耗時(shí)的超速離心,,過(guò)濾或特殊注射器;無(wú)需沉淀試劑,,也無(wú)需過(guò)夜培養(yǎng),;無(wú)需蛋白酶處理;適用于多種物種,;外泌體被純化并且不含任何其他RNA結(jié)合蛋白,;可以使用NanoSight?或電子顯微鏡分析純化的外泌體,以評(píng)估近似外泌體大小范圍和濃度,。外泌體(exosomes)是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡,。它普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號(hào)分子,,形成了一種全新的細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),,影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)。鄭州外泌體提取試劑推薦廠家