外泌體（exosome）,，特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。現(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有：肥大細胞,、淋巴細胞,、樹突狀細胞、瘤細胞,、間充質干細胞等,。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用,。同時，不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標志物,。細胞外囊泡是蛋白質、mRNA,、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類，包括外泌體,、微泡和凋亡小體,。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,，由多種細胞分泌,，內(nèi)含有特定的蛋白質、脂質,、細胞因子或遺傳物質,。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子，而且還包含其行使功能的關鍵分子,。外泌體提?。翰钏匐x心。差速離心仍然是較常見的外泌體分離技術之一,。貴陽正規(guī)外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：一是超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,，這種操作簡單,、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題,。三是密度梯度離心法,，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜,，耗時,，量少。四是免疫磁珠法,，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,，特異性高、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設備,，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗,。五是PS親和法,，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似,，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高,。由于不使用變性劑,，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù),，表明PS法可提取相當高純度的外泌體。六是色譜法,，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設備，應用不普遍,。徐州外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨外泌體的提取分離：試劑盒提取,。

外泌體可通過流式、WB（檢測指標有CD9,CD63,CD81）,、電鏡觀察,、NTA粒徑追蹤等手段檢測，普遍應用于藥物載體,、疾病診斷marker,、精細醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究,。由于外泌體直徑小,，樣本含量低,，提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心,、超濾離心法,、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等,。但到目前為止,，仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量、純度以及生物活性,。外泌體是細胞間進行物質運輸和信息交流的重要工具,，可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進一些病癥的增殖，血管新生和一些病癥轉移,。與細菌傳染,，幫助細菌逃避免疫關系很大，并與心血管疾病,，老年癡呆等疾病具有密切關系,。

外泌體的提取分離：1、超濾離心,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,，大于一般蛋白質，利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,，便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性,，是提取細胞外泌體的一種新方法,。2、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63,、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,，即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗,，難以普遍普及。外泌體提?。狠^常見的過濾膜具有0.8μm,、0.45μm或0.22μm的孔徑。

用于外泌體提取的體液收集注意事項：1,、抽血技巧,。操作要輕柔迅速。試管可翻轉8-10次使樣本與抗凝劑混勻,，避免劇烈搖晃,。混勻后,，將試管固定垂直放置于離心分離器,，在頂部記錄抽血的準確時間，因為抽血與離心之間的時間間隔可能是一個影響因素,。外泌體在抽血后30分鐘內(nèi)是比較穩(wěn)定的,，若時間過長將導致外泌體數(shù)量增加。血小板極易因抽血時的物理因素而并釋放出外泌體,，其中包括接觸,、壓力、切力,。2,、抽血時間。除了血液黏度,，體內(nèi)血液的各項指標在1天中變化很大,。生理節(jié)律會對血小板的產(chǎn)生很大的影響。白細胞的募集和循環(huán)系統(tǒng)中促炎細胞和細胞會隨時間變化,。大量的具有特殊表面分子的微粒也被證明會隨時間變化,。目前尚無設計較好的實驗對證實不同時間血液中外泌體的變化，故應在相同的時間采集樣本,。目前飲食是否會對EV產(chǎn)生影響尚未可知,，但是由于脂蛋白可運載RNA且食物的攝取可以影響循環(huán)脂蛋白顆粒的類型、數(shù)量和作用,，故抽血可在較后一次用餐后一段確定的時間進行,。外泌體的提取分離：密度梯度離心。唐山外泌體提取試劑廠家供應

用于外泌體提取的體液收集注意事項：避免劇烈搖晃,。貴陽正規(guī)外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨

外泌體的提取,、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法；尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論,，較初是根據(jù)蛋白質分子大小分離蛋白質的色譜技術,。該方法的主要優(yōu)點是不需要很大的離心力，從而保證了外泌體的完整性,。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白,，結果顯示,，后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應用提供了可能,。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法,，超濾一般被認為是外泌體分離過程中的一個準備過程，通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質,。不過連續(xù)的超濾可以分離出外泌體,，和超高速離心相比，超濾不需要特殊的設備就可以較短時間內(nèi)分離出外泌體,。但是,，超濾膜對外泌體的黏附作用會降低外泌體的產(chǎn)量，并且超濾過程中施加的外力可能會使外泌體變形或者破裂,。貴陽正規(guī)外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨

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