一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心,，簡化了提純步驟,。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純,。從提取原料到樣品生成過程中,，進(jìn)行多次真空冷凍干燥,，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉,；較后由滅菌、無菌包裝,，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本,，適用于生物醫(yī)用材料。結(jié)果無鼠尾膠原時,，前庭毛細(xì)胞懸浮于外液,，不宜封接。蕪湖鼠尾膠原推薦廠家

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,，成透明澄清黏稠溶液,；在冰水浴中,，調(diào)節(jié)pH = 6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時，去除上清液,，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀,； 2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物,，成透明澄清黏稠溶液，冰水浴中,，調(diào)節(jié)PH = 6.5 ;溶液依次通過陽離子交換樹脂,、陰離子交換樹脂進(jìn)行脫鹽處理； (8)將脫鹽后的膠原蛋白溶液,，-40至-20°C預(yù)凍2?4小時,，然后真空冷凍干燥，凍干產(chǎn)品經(jīng)進(jìn)一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉,，滅菌,、包裝，得到成品膠原蛋白粉末,。寧波長沙鼠尾膠原當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,，制備細(xì)胞爬片時，可在瓶底涂一層膠原,。

含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）,。加入760μL的細(xì)胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠,，在操作過程中要盡量保持低溫,。保存條件4℃保存,，切勿凍存，有效期一年,。

鼠尾膠原的提取步驟：配置含4.5mmol/lNacl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-Hcl溶液（用鹽酸將其PH值調(diào)至7.5） 取鼠尾,，去皮，由尖部向前分段抽取肌腱,，置于生理鹽水中,，稱重，再倒掉生理鹽水,，酒精中浸泡20分鐘 離心膠原溶液,，（1200rpm10min) 取上清 每600上述粗提液加100ml0.14mol/l NaOH溶液離心，（8000rpm 5min) 其上清,，留絮狀沉 10.將絮狀沉淀物置于三蒸水中,，用0.1mol/l(1000:6) 醋酸溶解絮狀沉淀物，加入消毒過的攪拌 子,，冷房攪拌數(shù)天,，得絮狀膠原。 注意所有和膠原有關(guān)的操作都在冰上進(jìn)行\(zhòng) Rat tail collagen type 配置含4.5mmol/L NaCl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-HCl 溶液（用鹽酸將其pH值調(diào)至7.5）,； 于-20冰箱中取出鼠尾,，浸泡75%或70%酒精，解凍,； 在一小培養(yǎng)皿中放置少量生理鹽水,，置于電子秤上，調(diào)零,； 取鼠尾,，去皮，由尖部向前分段抽取肌腱,，置于生理鹽水中,。整個操作請在無菌環(huán)境下無菌操作，避免污染以影響細(xì)胞生長,。

鼠尾膠原簡介：鼠尾I型膠原蛋白（Collagenfromrattail,TypeI）系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備,，純度達(dá)到95%以上,，可溶于0.006mol/L乙酸,。本品可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),；也可用于制備三維膠原凝膠,，使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：1,、SDS-PAGE分析純度大于95%,。2,、無菌檢驗結(jié)果為陰性。3,、本品2μg/cm2包被細(xì)胞培養(yǎng)皿后培養(yǎng)PC-12細(xì)胞,，貼壁及生長正常。4,、本品濃度1mg/mL,，pH7.0時形成具有一定強(qiáng)度的三維膠原凝膠，NIH-3T3細(xì)胞在三維凝膠內(nèi)生長正常,、PC-12細(xì)胞在三維凝膠表面生長正常,。一種基于鼠尾膠原蛋白：各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?% 2% 1%，余量的水,。無錫正規(guī)鼠尾膠原服務(wù)電話

按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜。蕪湖鼠尾膠原推薦廠家

鼠尾膠原蛋白I型,，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動或攪拌,。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。 4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥,。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。 在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。蕪湖鼠尾膠原推薦廠家