凍存細(xì)胞注意事項：冷凍保護劑可降低培養(yǎng)基的冰點,，并可減緩冷卻速度,，較大降低冰晶形成的危險(冰晶可損傷細(xì)胞,，導(dǎo)致細(xì)胞死亡),。注：DMSO可促進有機分子進入組織,。操作含DMSO的試劑時,，應(yīng)采用與此類物質(zhì)安全危害相適應(yīng)的設(shè)備和操作規(guī)范,，并應(yīng)按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)處置此類試劑。建議可使用廠商生產(chǎn)的無血清細(xì)胞凍存液,，使用方便,，復(fù)蘇率高。注意冷凍保護劑DMSO的品質(zhì)：DMSO應(yīng)為試劑級等級,，無菌且無色,，以5-10ml小體積分裝，4℃避光保存,，勿作多次解凍,。無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢：即用型，無需現(xiàn)配,，直接將細(xì)胞懸浮于凍存液中即可,。廣州無血清細(xì)胞凍存液

產(chǎn)品特性：a.可直接放置于-80℃冰箱，無需降溫,，節(jié)省時間和精力,；b.即用型，無需現(xiàn)配,，操作方便,，可減少實驗中因操作引起的污染；c.在多種哺乳細(xì)胞系中經(jīng)過性能驗證,，其復(fù)蘇率和活率達(dá)90%以上,；d.可長期存儲于-80℃冰箱(5年以上)，取用方便,；e.采用成分明確的無血清配方,，價格比常規(guī)自配細(xì)胞凍存液更為低廉；保存溫度：2~8℃具體操作步驟：1,、培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中細(xì)胞按常規(guī)方法消化,，或分離獲得原代細(xì)胞后，收集于離心管中,。2,、使用離心機離心，去除上清,，收集細(xì)胞沉淀。3,、根據(jù)細(xì)胞生長密度加入適量的細(xì)胞凍存液進行重懸,，充分混勻(推薦凍存密度為 1-2×106/ml)。4,、將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中,，直接放置于-80℃冰箱保存,。24小時后可移入液氮長期保存(可選)。寧波正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液直銷廠家無血清細(xì)胞凍存液可用于T淋巴細(xì)胞,、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存儲,。

細(xì)胞凍存秘籍：1.在倒置相差顯微鏡上每隔幾分鐘檢查酶處理的進展情況。一旦細(xì)胞變圓,，輕輕敲擊細(xì)胞瓶使其脫離塑料表面,。加入5 mL含血清的生長培養(yǎng)基滅活胰酶?？赡苄枰獎×业囊埔翰僮鱽硎古囵B(yǎng)容器底部的剩余細(xì)胞脫落,，或?qū)⒓?xì)胞團塊分解成單細(xì)胞懸浮液。胰酶的去除或失活對于冷凍細(xì)胞至關(guān)重要,。如果游離試劑不能直接滅活,，可以通過下一步的離心去除。2.用15ml離心管收集細(xì)胞,。取出樣本進行細(xì)胞計數(shù),，剩余的細(xì)胞懸液以約100×g離心5分鐘以獲得細(xì)胞沉淀。離心時,，用細(xì)胞計數(shù)板對細(xì)胞進行計數(shù),。使用臺盼藍(lán)染液檢查細(xì)胞的活性。

無血清細(xì)胞凍存液與含血清細(xì)胞凍存液對比：傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液是使用培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例混合,，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%,，統(tǒng)稱為含血清細(xì)胞凍存液,。含血清細(xì)胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,，然后移至-20℃冰箱30分鐘,，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時（或隔夜），較后才移至液氮罐中進行長期的儲存,?？梢姡寮?xì)胞凍存液凍存細(xì)胞時遇到的問題：1.凍存細(xì)胞時需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液,，此步可省略),。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步驟繁瑣,，耗時耗力,。3.含血清，細(xì)胞污染(病毒,、霉菌和支原體等)的風(fēng)險更高,。4.血清批次,、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異。5.需液氮凍存,，且不能原位（如孔板）凍存,。1000 rmp離心5分鐘，去除離心管中的上清液,，收集細(xì)胞沉淀,。

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外,，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買,、寄贈、交換和運送某些細(xì)胞,。細(xì)胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下,，細(xì)胞內(nèi)水分透出,，減少了冰晶形成，從而避免細(xì)胞損傷,。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活,。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/min，當(dāng)溫度低于-25℃時可加速,，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃),。無血清凍存液用途：為確保產(chǎn)品質(zhì)量，請避免反復(fù)凍融相關(guān)產(chǎn)品,。深圳無血清細(xì)胞凍存液

無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢：含DMSO,、糖類、氨基酸等成分的一款通用型細(xì)胞凍存液,。廣州無血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞凍存：取出凍存管,，注明細(xì)胞名稱，代數(shù),，日期,。離心后，以無菌吸管吸棄上清,，不要吸到底部的細(xì)胞沉淀,。將細(xì)胞沉淀與凍存液充分混勻，根據(jù)計數(shù)結(jié)果,，將細(xì)胞總數(shù)調(diào)節(jié)成細(xì)胞數(shù)量為5-10*105/ml為宜,。將細(xì)胞凍存懸液分裝進細(xì)胞凍存管中，一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜,。嚴(yán)密封口后,，使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1℃,?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中,，然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜,。若無凍存盒及其他凍存裝置，可以先將凍存管置于4℃30min,，再-20℃凍存1h直至完全冷凍,，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜。第二天將已經(jīng)冷凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮容器中,，置于液氮上方的氣相空間中儲存,。廣州無血清細(xì)胞凍存液

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