鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,，pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來中和,。需要的溶液 ( 均需要 無菌 ,、 預(yù)冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul生友鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入 690ul H2O,。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入100ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用pH試紙測試)。鼠尾I型膠原蛋白系采用方法在無菌下制備,，純度達(dá)到95%以上,。寧波太原鼠尾膠原

膠原蛋白的應(yīng)用：1.膠原天然的緊密的纖維結(jié)構(gòu)，使膠原材料顯示出很強(qiáng)的韌性和強(qiáng)度,，適用于薄膜材料的制備,；2.大較膠原被用作制造腸衣等可食用包裝材料．其獨(dú)特之處是：在熱處理過程中．隨著水分和油脂的蒸發(fā)和熔化．膠原幾乎與肉食的收縮率一致。而其他的可食用包裝材料還沒被發(fā)現(xiàn)具有這品質(zhì),；3.由于膠原分子鏈上含有大量的親水基團(tuán)． 所以與水結(jié)合的能力很強(qiáng)． 這一性質(zhì)使膠原在食品中可以用作填充劑和凝膠,；4.膠原在酸性和堿性介質(zhì)中膨脹，這一性質(zhì)也應(yīng)用于制備膠原基材料的處理工藝中,。廈門鼠尾膠原廠家批發(fā)價(jià)使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。

一種基于鼠尾膠原蛋白：1.一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，為鼠尾膠原蛋白,、聚乙烯醇,、殼聚糖、水制成的凍干止血材料,，各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?1-10% 0. 2-5% 0.2-2%，余量為水。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,，其特征在于凍干止血材料中,，各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?% 2% 1%，余量的水,。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,，其特征在于鼠尾膠原蛋白來源于各品系SFP級大鼠鼠尾。

含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻。再加入23ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測試),。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,。

實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用,。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果,。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞,，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽性，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征,。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,，并且制作簡便,成本低廉。鼠尾膠原醋酸溶解：將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,。寧波太原鼠尾膠原

我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白。寧波太原鼠尾膠原

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋,，其中每 3個(gè)氨基酸殘基形成一圈螺旋。3 條左手螺旋再扭在一起形成一個(gè)右手大螺旋,。這樣的螺旋稱為 3股螺旋,。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部,。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃，這些棒狀分子首尾相連,，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）,。膠原分子在兩端及沿軸向每隔 680埃的距離存在極性區(qū)，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合,，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。寧波太原鼠尾膠原