膠原蛋白分離提純實(shí)驗(yàn)方案：提取鼠尾膠原蛋白的實(shí)驗(yàn)步驟： 1,、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對(duì)初步處理的鼠尾腱進(jìn)行 酶解， 持續(xù)一段時(shí)間待混合物變成無色,、 透明,、 粘稠液體后即可在 4℃， 5000g 的離心力下離心 20min,， 收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液,。 2、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中,，持續(xù)攪拌直至白色絮狀沉淀 從溶液中析出,，繼續(xù)加入氯化銨直至沉淀不在析出為止，4℃,，5000g 的離心力下離心 20min 后獲得白色沉淀,。 沉淀物加入一定濃度的醋酸 溶液中溶解。 3,、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續(xù)反復(fù)進(jìn)行鹽析處理,，重復(fù)步驟 2 的過程 2~4 次。 _x000c_鼠尾膠原蛋白經(jīng) SDS- PAGE 蛋白質(zhì)電泳,。鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,，pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠。杭州深圳鼠尾膠原

鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞（特別是上皮細(xì)胞）貼壁的作用,，同時(shí)它也是一種天然的黏附劑，當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,，制備細(xì)胞爬 片時(shí),，可在瓶底涂一層膠原,，再放上小玻片，自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中,。通 過本實(shí)驗(yàn)可掌握鼠尾膠原的制備方法,，以及如何切割小玻片，并利用鼠尾膠原將其固定于 培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),。 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料： 大鼠尾巴、剪刀,、鑷子,、止血鉗、彎頭吸管,、平皿,、三角燒瓶、燒杯,、量筒,、天平、生理 鹽水,、75%酒精,、0.1%醋酸溶液、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆、鼠尾膠原,。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 1,、制備鼠尾膠原。 2,、切割小玻片,。 3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),。太原正規(guī)鼠尾膠原哪家好制備鼠尾膠原：重復(fù)步驟2,、3，直至尾腱量夠用,。

鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用,。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果,。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞,，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽性，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征,。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,，并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉,。

一種基于鼠尾膠原蛋白：1.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，其特征在于凍干止血材料中,，各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?% 2% 1%,，余量的水。2.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,，其特征在于鼠尾膠原蛋白來源于各品系SFP級(jí)大鼠鼠尾,。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料，其特征在于劑型為創(chuàng)可貼,。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,，其特征在于劑型為噴霧劑?？芍苯踊蜷g接參與細(xì)胞的附著,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,，并放置于冰浴中,。將200ul鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入23ul 10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。鼠尾膠原醋酸溶解：在2-8度中放置過夜。南昌正規(guī)鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

膠原蛋白是一種蛋白質(zhì),，能幫助連接皮膚,，骨頭和肌腱等身體組織。杭州深圳鼠尾膠原

簡(jiǎn)介：鼠尾I型膠原蛋白（Collagenfromrattail,TypeI）系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備,，純度達(dá)到95%以上,，可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被,，特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),；也可用于制備三維膠原凝膠，使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：1,、SDS-PAGE分析純度大于95%,。2、無菌檢驗(yàn)結(jié)果為陰性,。3,、本品2μg/cm2包被細(xì)胞培養(yǎng)皿后培養(yǎng)PC-12細(xì)胞，貼壁及生長正常,。4,、本品濃度1mg/mL，pH7.0時(shí)形成具有一定強(qiáng)度的三維膠原凝膠,，NIH-3T3細(xì)胞在三維凝膠內(nèi)生長正常,、PC-12細(xì)胞在三維凝膠表面生長正常。杭州深圳鼠尾膠原

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