一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血的優(yōu)點(diǎn)：1、本發(fā)明制作的止血材料采用溫和的冷凍干燥操作工藝不光光提高了生產(chǎn)效率,， 同時(shí)避開(kāi)了使用其他設(shè)備帶來(lái)的成本上升問(wèn)題,。2、本發(fā)明專利生產(chǎn)的止血材料(止血海綿)，其動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明其具有非常好的止血效果,。也可應(yīng)用于內(nèi)臟出血,。具有廣闊的應(yīng)用前景。3,、本發(fā)明制備的止血材料具有可完全被人體吸收,，與出血?jiǎng)?chuàng)面一接觸，其接觸面迅速形成凝膠而粘附在出血?jiǎng)?chuàng)面上,，外面則形成連續(xù)的壓迫干層,。啟動(dòng)凝血因子。同時(shí),，聚乙烯醇為成膜材料,，兩種的協(xié)同效應(yīng)形成了一種理想的止血狀態(tài)和結(jié)構(gòu)。制備鼠尾膠原：手持尾巴,，用止血鉗夾住鼠尾的,，折斷尾骨后拉出尾腱。青島鼠尾膠原平均價(jià)格

鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察：果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時(shí)呈微白色,；礦化2 d后,，膠體的顏色逐漸加深至乳白色；礦化6 d后,，隨著羥基磷灰石晶體礦化長(zhǎng)入膠原纖維內(nèi)部,，膠體顏色加深至純白色，并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體,，予鑷子夾起,，其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落。TEM表征顯示：礦化2 d后,，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結(jié)構(gòu)逐漸模糊,，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內(nèi)部，膠原纖維部分礦化,，沿著膠原纖維生長(zhǎng),，忖度變深；礦化6 d后,，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結(jié)構(gòu)完全消失,，膠原纖維內(nèi)部可以看到黑色羥基磷灰石晶體，嵌入膠原纖維縱向生長(zhǎng),。當(dāng)鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時(shí),，由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù)，膠原纖維呈現(xiàn)黑色,，選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征,。鼠尾膠原單價(jià)酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。

鼠尾膠原制備詳細(xì)步驟： 1,、取大鼠尾巴洗凈,，75%酒精浸泡 5 分鐘； 2.將尾巴剪開(kāi),、去掉皮毛,，并剪成小段，抽出銀色的尾鍵 3,、將尾腱剪斷置于平皿中,，PBS 浸泡； 4,、將所有的尾鍵放于 Tris-HCl 中,，4 度過(guò)夜。 0.05mol/L Tris-bas 的 Tris-HCl 的配制方法,。 稱量 6gTris 置于 1L 燒杯中,，加入約 800ml 去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?，濃鹽酸調(diào)節(jié) PH,，高壓滅菌,。 5,、吸去 Tris-HCl，將尾腱稱重（0.5-1 克）,； 6,、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中,； 7,、按每克尾腱 50ml 的比例，加入 0.1%醋酸溶液,； 8,、搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中,，4℃放置一星期,； 9、離心,，4 度 4000 轉(zhuǎn)/分,，30 分鐘； 10,、吸取上清,，過(guò) 300 目濾器,。 11、每 600ml 上述粗提液中加入 100ml 0.14 mol/LNaOH,，8000 轉(zhuǎn) 5min 離心,，棄上清，留絮狀沉淀,。 12,、將絮狀沉淀物置于三蒸水中，用 0.1mol/L（1000:6）醋酸溶解沉淀物,。

膠原蛋白的應(yīng)用：1.膠原天然的緊密的纖維結(jié)構(gòu),，使膠原材料顯示出很強(qiáng)的韌性和強(qiáng)度，適用于薄膜材料的制備,；2.大較膠原被用作制造腸衣等可食用包裝材料．其獨(dú)特之處是：在熱處理過(guò)程中．隨著水分和油脂的蒸發(fā)和熔化．膠原幾乎與肉食的收縮率一致,。而其他的可食用包裝材料還沒(méi)被發(fā)現(xiàn)具有這品質(zhì)；3.由于膠原分子鏈上含有大量的親水基團(tuán)． 所以與水結(jié)合的能力很強(qiáng)． 這一性質(zhì)使膠原在食品中可以用作填充劑和凝膠,；4.膠原在酸性和堿性介質(zhì)中膨脹,，這一性質(zhì)也應(yīng)用于制備膠原基材料的處理工藝中。注意事項(xiàng)：在室溫下pH 中性時(shí)可迅速成膠,，在操作過(guò)程中要 盡量保持低溫,。

I型鼠尾膠原是借鑒Navneeta Rajan, Jason Habermehl法，經(jīng)過(guò)乙酸抽提,、離心,、滅菌、透析等步驟制備得到的高純度,、高活性膠原蛋白,，屬于醫(yī)藥級(jí)別產(chǎn)品，可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿（單分子層包被）,，適合多種類型細(xì)胞的貼壁如肝臟細(xì)胞,、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、胚胎細(xì)胞,、肌細(xì)胞,、肺細(xì)胞、神經(jīng)鞘細(xì)胞等,。I型膠原蛋白包被細(xì)胞培養(yǎng)板,，規(guī)格為6/24孔板，表面經(jīng)I型膠原蛋白包被,，可以很好的降低蛋白質(zhì)的吸附,。使用這種細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞，可以獲得良好的細(xì)胞貼壁率,，細(xì)胞增殖速度快,，形態(tài)均一,，細(xì)胞培養(yǎng)成功率高。吸去生理鹽水,，將尾腱稱重（0.5-1克）,。蕪湖正規(guī)鼠尾膠原哪里買

結(jié)果無(wú)鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞懸浮于外液,，不宜封接,。青島鼠尾膠原平均價(jià)格

含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞，并放置于冰浴中,。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,，初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值）,。加入760μL的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。本品在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠,，在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,，切勿凍存,，有效期一年,。青島鼠尾膠原平均價(jià)格

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