鼠尾膠原的提取步驟：配置含4.5mmol/lNacl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-Hcl溶液（用鹽酸將其PH值調(diào)至7.5） 取鼠尾,，去皮，由尖部向前分段抽取肌腱,，置于生理鹽水中,，稱重，再倒掉生理鹽水,，酒精中浸泡20分鐘 離心膠原溶液,，（1200rpm10min) 取上清 每600上述粗提液加100ml0.14mol/l NaOH溶液離心，（8000rpm 5min) 其上清,，留絮狀沉 10.將絮狀沉淀物置于三蒸水中,，用0.1mol/l(1000:6) 醋酸溶解絮狀沉淀物，加入消毒過(guò)的攪拌 子,，冷房攪拌數(shù)天,，得絮狀膠原,。 注意所有和膠原有關(guān)的操作都在冰上進(jìn)行\(zhòng) Rat tail collagen type 配置含4.5mmol/L NaCl 和0.05mol/l Tris-base 的Tris-HCl 溶液（用鹽酸將其pH值調(diào)至7.5）,； 于-20冰箱中取出鼠尾，浸泡75%或70%酒精,，解凍,； 在一小培養(yǎng)皿中放置少量生理鹽水，置于電子秤上,，調(diào)零,； 取鼠尾,，去皮，由尖部向前分段抽取肌腱,，置于生理鹽水中,。使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。蕪湖鼠尾膠原廠家供應(yīng)

鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察：果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時(shí)呈微白色,；礦化2 d后,，膠體的顏色逐漸加深至乳白色；礦化6 d后,，隨著羥基磷灰石晶體礦化長(zhǎng)入膠原纖維內(nèi)部,，膠體顏色加深至純白色，并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體,，予鑷子夾起,，其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落。TEM表征顯示：礦化2 d后,，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結(jié)構(gòu)逐漸模糊,，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內(nèi)部，膠原纖維部分礦化,，沿著膠原纖維生長(zhǎng),，忖度變深；礦化6 d后,，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結(jié)構(gòu)完全消失,，膠原纖維內(nèi)部可以看到黑色羥基磷灰石晶體，嵌入膠原纖維縱向生長(zhǎng),。當(dāng)鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時(shí),，由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù)，膠原纖維呈現(xiàn)黑色,，選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征,。蘇州正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)鼠尾膠原蛋白的用途是什么：顧名思義，鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來(lái)的物質(zhì),。

酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對(duì)分子質(zhì)量和濃度檢測(cè)鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下,，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子,。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150 μL滴在薄膜上,，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠( ，其生物力學(xué)強(qiáng)度極差,，一碰即散,。將鼠尾膠原蛋白進(jìn)行SDS-PAGE，結(jié)果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對(duì)分子質(zhì)量130 000附近有明顯條帶,，另一條帶的相對(duì)分子質(zhì)量大于170 000(圖 2) ,。膠原蛋白濃度為1.8 mg/mL,。吸取礦化液倒入小培養(yǎng)皿中，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中,。礦化2,、6 d后，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進(jìn)行TEM和電子衍射觀察,。

膠原蛋白分離提純實(shí)驗(yàn)方案：提取鼠尾膠原蛋白的實(shí)驗(yàn)步驟： 1,、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對(duì)初步處理的鼠尾腱進(jìn)行 酶解， 持續(xù)一段時(shí)間待混合物變成無(wú)色,、 透明,、 粘稠液體后即可在 4℃， 5000g 的離心力下離心 20min,， 收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液,。 2、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中,，持續(xù)攪拌直至白色絮狀沉淀 從溶液中析出,，繼續(xù)加入氯化銨直至沉淀不在析出為止，4℃,，5000g 的離心力下離心 20min 后獲得白色沉淀,。 沉淀物加入一定濃度的醋酸 溶液中溶解。 3,、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續(xù)反復(fù)進(jìn)行鹽析處理,，重復(fù)步驟 2 的過(guò)程 2~4 次。 _x000c_鼠尾膠原蛋白經(jīng) SDS- PAGE 蛋白質(zhì)電泳,。探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果,。

含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞，并放置于冰浴中,。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,，初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值）,。加入760μL的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。本品在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠,，在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,，切勿凍存,，有效期一年。4°C沉淀10小時(shí),，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀,。溫州鼠尾膠原廠家推薦

鼠尾膠原醋酸溶解：不建議用過(guò)濾的方法無(wú)菌化,。蕪湖鼠尾膠原廠家供應(yīng)

膠原蛋白的提取方法：酸法提取：酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料,，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿,，而引起纖維膨脹、溶解,。作為溶劑使用的酸,，主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸,、硫酸,、醋酸、檸檬酸和甲酸等,。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。此法處理快速,，所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的,，適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備，但產(chǎn)品得率低,，設(shè)備腐蝕嚴(yán)重,，污染重。趙蒼碧等[2]采用0.3 %的醋酸溶液在4 ℃下從牛腱中提取膠原蛋白,，得到高純度的膠原蛋白溶液,。蕪湖鼠尾膠原廠家供應(yīng)