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銅綠假單胞菌含有O抗原(菌體抗原)以及H抗原(鞭毛抗原),。O抗原包含兩種成分:一種是其外膜蛋白,,為保護(hù)性抗原;另一種是脂多糖,,有特異性,。O抗原可用以分型。銅綠假單胞菌的標(biāo)本采集,,分別來(lái)自不同影響部位的各種標(biāo)本,,包括血液、尿液,、痰標(biāo)本,、膿汁,、穿刺液等。還包括來(lái)自醫(yī)院環(huán)境中的各種標(biāo)本如水,、空氣,、物體表面采樣等。通過(guò)染色鏡檢,,銅綠假單胞菌為革蘭陰性桿菌,,菌體大小(1.5~5.0)um×寬(0.5~1)um,細(xì)長(zhǎng)且長(zhǎng)短不一,,有時(shí)呈球桿狀或線(xiàn)狀,,成對(duì)或短鏈狀排列。菌體的一端有單鞭毛,,無(wú)芽胞,,無(wú)莢膜。銅綠假單胞菌的標(biāo)本采集,,分別來(lái)自不同影響部位的各種標(biāo)本,。巴氏芽孢桿菌菌株
對(duì)銅綠假單胞桿菌的復(fù)蘇,要先準(zhǔn)備一個(gè)茶缸或1000毫升的燒壞,,內(nèi)裝2/3杯37攝氏度的溫水,。從液氮中取出凍存管、迅速置于溫水中并不斷攪動(dòng),。使凍存管中的凍存物在1分鐘之內(nèi)融化,。打開(kāi)凍存管,將細(xì)胞懸液吸到離心管中,。1000rpm離心10分鐘,,棄去上清液。沉淀加10毫升培養(yǎng)液,,吹打均勻,,再離心10分鐘,棄上清液,。加適當(dāng)培養(yǎng)基后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,,37攝氏度培養(yǎng),第二天觀察生長(zhǎng)情況,。器材通常為液氮罐,、凍存管(塑料螺口凍存管或安瓿瓶)、離心管,、吸管,、離心機(jī)等。試劑通常為0.25%胰酶,、培養(yǎng)基,、含保護(hù)劑的培養(yǎng)基(即凍存液),。凍存液配制是培養(yǎng)基加入甘油或DSMO,使其終濃度達(dá)5—20%,。保護(hù)劑的種類(lèi)和用量視不同細(xì)胞而不同,。配好后4攝氏度下保存。魯?shù)劓溍咕昕莶菅挎邨U菌單個(gè)細(xì)胞0.7~0.8×2~3微米,,著色均勻,。
有些銅綠假單胞桿菌的保藏方法,如濾紙保藏法,、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來(lái)制備細(xì)胞懸液,,以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。保護(hù)性溶質(zhì)可通過(guò)氫和離子鍵對(duì)水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來(lái)穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型,。保護(hù)劑有牛乳,、血清、糖類(lèi),、甘油,、二甲亞砜等。銅綠假單胞桿菌的多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)基本原理類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程,,其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物,。PCR由變性、退火,、延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成模板DNA經(jīng)加熱至93攝氏度左右一定時(shí)間后,,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備,。
根據(jù)大腸桿菌在染上過(guò)程中能否產(chǎn)生腸毒的能力,,可將大腸桿菌分為兩大類(lèi):即產(chǎn)腸有毒的大腸桿菌和非產(chǎn)腸有毒的大腸桿菌。產(chǎn)腸有毒的大腸桿菌是人和多種動(dòng)物的任何染上性腹瀉的重要病原,,鑒定產(chǎn)腸有毒的大腸桿菌主要是測(cè)定所分離大腸桿菌分泌的腸毒的類(lèi)型,。除此之外,也可以根據(jù)大腸桿菌產(chǎn)生腸毒的能力,,結(jié)合其對(duì)不同腸毒的敏感性,,而將大腸桿菌分型,稱(chēng)為腸毒型,。產(chǎn)腸毒的大腸桿菌進(jìn)入機(jī)體后,,定植在小腸上皮細(xì)胞的表面,不損傷小腸上皮細(xì)胞也不侵入粘膜,,而是通過(guò)產(chǎn)生的腸毒而引起腹瀉,。大腸桿菌有不耐熱的腸毒和耐熱的腸毒兩種,,均由質(zhì)粒編碼。根據(jù)所產(chǎn)生的大腸桿菌腸毒類(lèi)型,,可將產(chǎn)腸有毒的大腸桿菌細(xì)分為L(zhǎng)T株,、ST株(只產(chǎn)生一種,LT或ST)及LT/ST株(能產(chǎn)生兩種腸毒),。大腸桿菌可以發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸,、產(chǎn)氣。
大腸桿菌檢測(cè)方法:ATP生物發(fā)光法:在近些年的發(fā)展過(guò)程中,,生物發(fā)光技術(shù)應(yīng)用很廣,,是一種比較快速的檢測(cè)微生物的技術(shù)。在活性細(xì)胞中,,ATP是其常見(jiàn)的能量代謝產(chǎn),,可以提供細(xì)胞生理活動(dòng)過(guò)程中所需的能量。并且,,該技術(shù)可以在生物體內(nèi)可以在一定范圍內(nèi)保持一定的含量,。食品中的大腸桿菌檢測(cè)技術(shù)可以采用熒光光度的方法,因?yàn)樯矬w發(fā)光的原因是有熒光素酶的作用,,產(chǎn)生了發(fā)光的效果,。該物質(zhì)來(lái)源于北美的螢火蟲(chóng)體內(nèi),可以催化熒光素的氧化作用,,不過(guò),,該物質(zhì)性質(zhì)不穩(wěn)定,可以對(duì)熒光進(jìn)行快速分解,。另外,,該檢測(cè)技術(shù)結(jié)果獲得過(guò)程是非常快的,,并且該設(shè)備攜帶方便,,十分適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。在銅綠假單胞菌中,,噬菌體分型所應(yīng)用的噬菌體現(xiàn)有24株,,分型率達(dá)90%。唾液乳桿菌水楊素亞種菌株
銅綠假單胞菌存在的重要條件是潮濕的環(huán)境,。巴氏芽孢桿菌菌株
葡萄球菌屬因其聚成葡萄串一樣而得名,。是常見(jiàn)的化膿性球菌。醫(yī)務(wù)人員帶菌率高達(dá)70%以上,。而且可能是耐藥性菌株,,可成為院內(nèi)傳染的重要傳染源。葡萄球菌呈球形或橢圓形。直徑約0.5--1μm,。經(jīng)常以葡萄串狀排列,,有時(shí)可能散在、成雙,、短鏈狀存在,。沒(méi)有鞭毛、沒(méi)有芽孢,,體外培養(yǎng)一般不形成莢膜,,在體內(nèi)卻可形成莢膜。革蘭染色呈陽(yáng)性,。衰老,、死亡、被吞噬細(xì)胞吞噬,、青霉素等藥物作用下,,菌體可革蘭染色陰性。葡萄球菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高,,普通培養(yǎng)基生長(zhǎng)良好,。需氧或兼性厭氧。在18--40℃均可生長(zhǎng),。耐鹽性強(qiáng),。在含有10%氯化鈉培養(yǎng)基中能生長(zhǎng),可用高鹽培養(yǎng)基分離菌種,。普通瓊脂平板上形成圓形,,表面光滑濕潤(rùn),不透明菌落,。典型菌株產(chǎn)生脂溶性的金黃色的色素而使菌落呈金黃色,。在血瓊脂平板上,因金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生溶素,,在菌落周?chē)纬擅黠@的透明溶血環(huán),。巴氏芽孢桿菌菌株
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