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數(shù)字PCR平臺(tái)的評(píng)價(jià)指標(biāo)有:分割單元數(shù),,熒光通道數(shù),,操作復(fù)雜性和污染風(fēng)險(xiǎn)。但是重要的是檢測(cè)準(zhǔn)確性,,評(píng)估數(shù)字PCR平臺(tái)的一種方法是使用多個(gè)數(shù)字PCR平臺(tái)互相驗(yàn)證,,另一種方法是使用定值準(zhǔn)確的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。目前的三代的PCR技術(shù)各有各的優(yōu)缺點(diǎn),,也各有各的應(yīng)用領(lǐng)域,,并不是一代取代一代的關(guān)系。技術(shù)的不斷進(jìn)步給PCR技術(shù)注入了新的活力,,使其能解鎖一個(gè)又一個(gè)的應(yīng)用方向,,使核酸檢測(cè)更方便、更準(zhǔn)確,。目前dPCR儀器的價(jià)格仍然十分昂貴,,但隨著系統(tǒng)加工工藝的改進(jìn)以及使用較便宜的材料,聚合成更小的體積[556],,其價(jià)格將會(huì)不斷的降低,,使其應(yīng)用到更多的檢測(cè)中,。全自動(dòng)數(shù)字PCR平臺(tái),讓數(shù)字PCR真正邁入新時(shí)代,,助推數(shù)字PCR普及應(yīng)用,。珠三角全自動(dòng)多重?cái)?shù)字PCR系統(tǒng)
PCR已成為分子診斷領(lǐng)域重要的技術(shù)手段之一,占據(jù)分子診斷市場(chǎng)的半壁江山,。數(shù)字PCR是一代PCR技術(shù),,也是當(dāng)前靈敏度和定量精度比較高的分子檢測(cè)技術(shù)。但數(shù)字PCR使用成本仍然相對(duì)較高,,檢測(cè)靶點(diǎn)數(shù)少(一般≤6靶點(diǎn)/反應(yīng)),,阻礙了其在臨床中的大規(guī)模應(yīng)用,提高數(shù)字PCR的多重檢測(cè)能力迫在眉睫,?;跓晒馔ǖ罃?shù)的增加和基于探針濃度梯度增加,均可以在一定程度上提高數(shù)字PCR檢測(cè)重?cái)?shù),,然而只能達(dá)到"線性"增加的目的,。基于探針濃度梯度的多重檢測(cè)技術(shù)雖然光'f明顯增加多重能力,,但由于無法避免交叉反應(yīng)現(xiàn)象,,不能確保獲得位點(diǎn)特異性的分簇,因此穩(wěn)定性不足,、靈敏度較差,,難以滿足臨床級(jí)別的數(shù)據(jù)要求。而基于創(chuàng)新的且數(shù)字PCR獨(dú)特適用的熒光編碼技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)“指數(shù)”級(jí)的多重檢測(cè),,顛覆性的提高數(shù)字PCR檢測(cè)重?cái)?shù),,覆蓋臨床應(yīng)用多場(chǎng)景需求。德國全自動(dòng)數(shù)字PCR技術(shù)dPCR的測(cè)量結(jié)果通常表示為含量,,即拷貝數(shù)轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比,,而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
了解泊松分布,,我們先要從二項(xiàng)式分布說起,,二項(xiàng)式分布是一個(gè)離散概率分布,它給出了m次試驗(yàn)中k次成功的可能性,,每次試驗(yàn)的概率為p,,例如當(dāng)擲骰子時(shí),二項(xiàng)分布給出了在10次試驗(yàn)中恰好有7次擲出4的概率,。在數(shù)字PCR的情況中,,投擲骰子類似于將一個(gè)目標(biāo)實(shí)體隨機(jī)“投擲”到一組分區(qū)中,當(dāng)目標(biāo)落在選定的分區(qū)中時(shí),,就是成功,。如果有n個(gè)分區(qū),,并且分區(qū)過程是完全隨機(jī)的,則目標(biāo)出現(xiàn)在所選分區(qū)中的概率為1/n,。該試驗(yàn)重復(fù)m次,樣品中的每個(gè)分子一次,。如下所示的二項(xiàng)式分布給出了k個(gè)成功的概率,,即所選分區(qū)恰好包含k個(gè)分子的概率。數(shù)字PCR通常采用大量分區(qū),。當(dāng)n很大,,并且嘗試成功的概率(1/n)很小時(shí),二項(xiàng)分布可以近似為泊松分布,。
數(shù)字PCR技術(shù)的出現(xiàn)不是為了完全取代原有分子診斷技術(shù),,而是更好的補(bǔ)充和完善現(xiàn)有技術(shù)平臺(tái)。數(shù)字PCR為不同應(yīng)用場(chǎng)景下的多樣化核酸檢測(cè)需求提供了新的思路,,尤其是在臨床檢測(cè)方面,,在 性疾病早期檢測(cè)、 疾病的伴隨診斷,、生殖遺傳篩查等領(lǐng)域展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景,。國產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)在商業(yè)化應(yīng)用方面,也不斷“攻城略地”,。新羿生物在檢測(cè)及 疾病伴隨診斷方面開發(fā)了一系列試劑盒,,并積極推進(jìn)注冊(cè)臨床試驗(yàn);領(lǐng)航基因聚焦在血流 (膿毒癥)及呼吸道 領(lǐng)域,,相繼推出了多款病原菌檢測(cè)試劑盒,;銳訊生物聚焦于檢測(cè),2020年其產(chǎn)品獲得FDA緊急授權(quán),。除此之外,,在公共衛(wèi)生領(lǐng)域,國產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)針對(duì)食源性致病菌,、鼠疫,、蟲媒病毒等,也推出多種檢測(cè)試劑盒,。數(shù)字PCR具有諸多優(yōu)點(diǎn),,但也存在一定的不足,如成本高,、儀器操作復(fù)雜,、經(jīng)濟(jì)效益低等。
現(xiàn)有dPCR分析方法采用熒光探針和基于光的檢測(cè)方法來鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物,。這些方法要求足夠的靶分子擴(kuò)增以產(chǎn)生足以被檢測(cè)到的信號(hào),,但可能會(huì)導(dǎo)致額外的錯(cuò)誤或偏差,,因此,希望能夠提供一種改進(jìn)的,、用于檢測(cè)樣品內(nèi)感興趣的核酸的方法,,其采用替代性分析方法,具有提高的準(zhǔn)確度和精確度,,并且其具有可以與基于dPCR的方法關(guān)聯(lián)使用的靈敏度,。dPCR還在樣品內(nèi)進(jìn)行單一反應(yīng),但是所述樣品被分離成大量的分區(qū)(partition),,并且所述反應(yīng)在每個(gè)分區(qū)中單獨(dú)進(jìn)行,。這種分離允許對(duì)核酸量進(jìn)行靈敏的測(cè)量。DPCR已被證明可有效用于研究基因序列中的變異,,例如拷貝數(shù)變異或點(diǎn)突變,。數(shù)字PCR作為研發(fā)階段的驗(yàn)證方案之一。蘇州數(shù)字PCR市場(chǎng)前景
從市場(chǎng)規(guī)模來看,,目前數(shù)字PCR市場(chǎng)規(guī)模并不大,,全球約1.5億至2.5億美元。珠三角全自動(dòng)多重?cái)?shù)字PCR系統(tǒng)
數(shù)字PCR技術(shù)流分類目前,,dPCR的基本方法都已經(jīng)建立,,根據(jù)反應(yīng)單元的不同形式,主要可分為微板式,、微腔式和和微滴式三大類系統(tǒng),。微液滴制備的方法,目前主流的有四種:1)芯片微孔物理分割法,,俗稱物理分隔法,,公司有Fluidgm,Qiagen,,Roche,,ThermoFisher,;2)液滴分割法,,俗稱油包水,,代替公司有Bio-Rad;3)雜交式芯片液滴法,公司有Stilla;4)注射振動(dòng)制滴法,。PS:芯片式物理分割技術(shù)所有已經(jīng)過期,,目前有不少公司在這個(gè)技術(shù)的基礎(chǔ)上進(jìn)行開發(fā),例如羅氏,。珠三角全自動(dòng)多重?cái)?shù)字PCR系統(tǒng)
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司在數(shù)字PCR,,純水機(jī),病理切片機(jī),,倍性分析儀一直在同行業(yè)中處于較強(qiáng)地位,,無論是產(chǎn)品還是服務(wù),,其高水平的能力始終貫穿于其中。公司位于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號(hào)617房,,成立于2015-04-17,,迄今已經(jīng)成長(zhǎng)為精細(xì)化學(xué)品行業(yè)內(nèi)同類型企業(yè)的佼佼者。雙螺旋科學(xué)儀器以數(shù)字PCR,,純水機(jī),,病理切片機(jī),倍性分析儀為主業(yè),,服務(wù)于精細(xì)化學(xué)品等領(lǐng)域,為全國客戶提供先進(jìn)數(shù)字PCR,,純水機(jī),,病理切片機(jī),倍性分析儀,。多年來,,已經(jīng)為我國精細(xì)化學(xué)品行業(yè)生產(chǎn)、經(jīng)濟(jì)等的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn),。