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德國國產(chǎn)數(shù)字PCR油滴制造

來源: 發(fā)布時間:2023-04-07

PCR已成為分子診斷領(lǐng)域重要的技術(shù)手段之一,,占據(jù)分子診斷市場的半壁江山。數(shù)字PCR是一代PCR技術(shù),,也是當前靈敏度和定量精度比較高的分子檢測技術(shù),。但數(shù)字PCR使用成本仍然相對較高,檢測靶點數(shù)少(一般≤6靶點/反應(yīng)),,阻礙了其在臨床中的大規(guī)模應(yīng)用,,提高數(shù)字PCR的多重檢測能力迫在眉睫?;跓晒馔ǖ罃?shù)的增加和基于探針濃度梯度增加,,均可以在一定程度上提高數(shù)字PCR檢測重數(shù),然而只能達到"線性"增加的目的,?;谔结槤舛忍荻鹊亩嘀貦z測技術(shù)雖然光'f明顯增加多重能力,但由于無法避免交叉反應(yīng)現(xiàn)象,,不能確保獲得位點特異性的分簇,,因此穩(wěn)定性不足、靈敏度較差,,難以滿足臨床級別的數(shù)據(jù)要求,。而基于創(chuàng)新的且數(shù)字PCR獨特適用的熒光編碼技術(shù)可以實現(xiàn)“指數(shù)”級的多重檢測,顛覆性的提高數(shù)字PCR檢測重數(shù),覆蓋臨床應(yīng)用多場景需求,。我國數(shù)字PCR市場的整體規(guī)模,、公司影響力、行業(yè)話語權(quán)等也將迎來進一步提升,,從而助推行業(yè)高質(zhì)量創(chuàng)新發(fā)展,。德國國產(chǎn)數(shù)字PCR油滴制造

目前全球數(shù)字PCR的市場規(guī)模約1.5億-2.5億美元,約占熒光定量PCR市場規(guī)模(約20億美元)的10%,,但增長趨勢明顯,,有望逐步替代熒光定量PCR技術(shù)。目前國際市場有伯樂,、賽默飛,、凱杰、Stilla,、羅氏等主要數(shù)字PCR玩家,。根據(jù)MordorIntelliaence研究報告預(yù)測,2019-2024年全球qPCR和dPCR市場將以8.8%的年復(fù)合增長率增長,,從2014年的41.13億美元增長到2024年的62.7億美元,。其中,dPCR的增速更快達11.9%,,將從2014年的4.75億美元,,增長到2024年8.34億美元,為PCR檢測帶來極大的市場,。但其預(yù)測的發(fā)展趨勢仍有參考價值,。臻準數(shù)字PCR解決方案dPCR在轉(zhuǎn)基因檢測方面的應(yīng)用仍處于研究和探索的階段。

數(shù)字PCR是一種核酸分子定量技術(shù),。當前核酸分子的定量有三種方法,,光度法基于核酸分子的吸光度來定量;實時熒光定量PCR(RealTimePCR)基于Ct值,,Ct值就是指可以檢測到熒光值對應(yīng)的循環(huán)數(shù),;數(shù)字PCR是的定量技術(shù),基于單分子PCR方法來進行計數(shù)的核酸定量,,是一種定量的方法,。主要采用當前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法,將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中,,每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個,。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號,,沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號,。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。

數(shù)字PCR技術(shù)是繼一代普通PCR,、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術(shù),。該技術(shù)將一個樣本分成幾到幾十萬份,分配到不同的反應(yīng)單元,,每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子(DNA模板),,在每個反應(yīng)單元中分別對目標分子進行PCR擴增;擴增結(jié)束后,,將有熒光信號的微滴判讀為1,,沒有熒光信號的微滴判讀為0,,終根據(jù)泊松分布原理以及陽性微滴的比例,,計算出待檢靶分子的濃度或拷貝數(shù)。定量:不再依賴于Ct值和標準曲線,,直接給出靶序列的起始濃度,,實現(xiàn)真正意義上的定量。更高靈敏度與特異性:數(shù)字PCR可實現(xiàn)萬分之一稀有樣本的定量,,可用于極微量核酸樣本檢測,、復(fù)雜背景下的稀有突變檢測、表達量微小差異鑒定,、單細胞基因表達等方面,。數(shù)字PCR在分子診斷領(lǐng)域?qū)l(fā)揮巨大的作用,數(shù)字PCR適用于生物標志物研究,、拷貝數(shù)變異分析,、微生物檢測、轉(zhuǎn)基因生物檢測,、mRNA和miRNA檢測,、基因相對表達研究等,并對遺傳病,、,、產(chǎn)前診斷的研究提供了一種全新的技術(shù)思路與手段,具有廣的,、不可替代的應(yīng)用前景,。國產(chǎn)dPCR企業(yè)在上述應(yīng)用領(lǐng)域不斷與伯樂、賽默飛,、羅氏,、凱杰、因美納等頭部企業(yè)展開競爭,,搶占市場份額,。

數(shù)字PCR系統(tǒng)的分散方式?jīng)Q定了分散數(shù)量,其結(jié)果基于統(tǒng)計的方法進行定量,增加反應(yīng)單元數(shù)量(統(tǒng)計樣本量),,可以增加其檢測的容量和動態(tài)檢測線性范圍達到和qPCR相近的動態(tài)范圍,,同時減小一個反應(yīng)單元中包含多個分子所造成的誤差,達到提高靈敏度和準確度,。影響dPCR定量結(jié)果的因素包括:儀器采用的分散方式與數(shù)量,、溶液稀釋方法、分散體積的準確性以及結(jié)果表達方式,。分散方式與數(shù)量由數(shù)字PCR系統(tǒng)決定,,分散體積和結(jié)果表達方式需要實驗人員在實驗過程中優(yōu)化得到。20世紀末,,Bert Vogelstein等提出數(shù)字PCR的概念,。珠三角一體化數(shù)字PCR試劑盒

數(shù)字PCR適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域。德國國產(chǎn)數(shù)字PCR油滴制造

數(shù)字PCR技術(shù)的出現(xiàn)不是為了完全取代原有分子診斷技術(shù),,而是更好的補充和完善現(xiàn)有技術(shù)平臺,。數(shù)字PCR為不同應(yīng)用場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路,尤其是在臨床檢測方面,。國產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)在商業(yè)化應(yīng)用方面,,也不斷“攻城略地”。數(shù)字PCR作為當下靈敏的核酸檢測技術(shù),,盡管目前國產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)異軍突起,,在臨床市場中實現(xiàn)了彎道超車,但未來仍然需要聚焦客戶需求,,不斷夯實底層創(chuàng)新,,同時在檢測成本、自動化,、試劑盒申報注冊,、出海國際化等方面不斷努力,提供更為的解決方案,。國際局勢,,波譎云詭。在百年未有之大變局,,實現(xiàn)中華民族的偉大復(fù)興,,需要國內(nèi)企業(yè)瞄準技術(shù)高地,以爭分奪秒的精神,,解決技術(shù)"卡脖子"的難題,,不斷攻堅克難,自主創(chuàng)新,,在與國際品牌的同臺競技中,,彰顯中國實力,。德國國產(chǎn)數(shù)字PCR油滴制造

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