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來源: 發(fā)布時(shí)間:2020-01-04

分離純化多肽的常用方法-反相高效液相色譜 結(jié)果與保留值之間的關(guān)系:利用RP-HPLC 分離多肽首先得確定不同結(jié)構(gòu)的多肽在柱上的保留情況,。為了獲得一系列的保留系數(shù),,Wilce 等利用多線性回歸方法對2106 種肽的保留性質(zhì)與結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,,得出了不同氨基酸組成對保留系數(shù)影響的關(guān)系,,其中極性氨基酸殘基在2~20 氨基酸組成的肽中,可減少在柱上的保留時(shí)間,;在10~60 氨基酸組成的肽中,,非極性氨基酸較多也可減少在柱上的保留時(shí)間,,而含5~25 個(gè)氨基酸的小肽中,,非極性氨基酸增加可延長在柱上的保留時(shí)間,。 同時(shí)有不少文獻(xiàn)報(bào)道了肽鏈長度、氨基酸組成,、溫度等條件對保留情況的影響,,并利用計(jì)算機(jī)處理分析得到每種多肽的分離提取的比較好條件。 肽圖分析(Peptide Mapping):肽圖分析是根據(jù)蛋白質(zhì),、多肽的分子量大小以及氨基酸組成特點(diǎn),使用專一性較強(qiáng)的蛋白水解酶[ 一般未肽鏈內(nèi)切酶(endopeptidase)]作用于特殊的肽鏈位點(diǎn)將多肽裂解成小片斷,,通過一定的分離檢測手段形成特征性指紋圖譜,,肽圖分析對多肽結(jié)構(gòu)研究合特性鑒別具有重要意義。 合肥多肽分離填料制造廠家

分離純化多肽的常用方法-膜蛋白色譜 CMP+分離強(qiáng)蔬水性蛋白,、多肽混合物的層析系統(tǒng),,一般有去垢劑(如SDS)溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白,,并由羥基磷灰石為固定相的柱子分離純化。羥基磷灰石柱具有陰離子磷酸基團(tuán)(P-端),,又具有陽離子鈣(C-端),,與固定相結(jié)合主要決定于膜蛋白的大小、SDS 結(jié)合量有關(guān),。利用原子散射法研究cAMP的分離機(jī)制發(fā)現(xiàn),,樣品與SDS 結(jié)合后在離子交換柱上存在SDS 分子、帶電荷氨基酸與固定相中帶電離子間的交換,,從而達(dá)到分級分離的目的,。直銷多肽分離填料

分離純化多肽的常用方法-高效液相色譜(HPLC) HPLC 的出現(xiàn)為肽類物質(zhì)的分離提供了有利的方法手段,因?yàn)榈鞍踪|(zhì),、多肽的HPLC 應(yīng)用與其它化合物相比,,在適宜的色譜條件下不僅可以在短時(shí)間內(nèi)完成分離目的,更重要的是HPLC 能在制備規(guī)模上生產(chǎn)具有生物活性的多肽,。因此在尋找多肽類物質(zhì)分離制備的比較好條件上,,不少學(xué)者做了大量的工作。如何保持多肽活性,、如何選擇固定相材料,、洗脫液種類、如何分析測定都是目前研究的內(nèi)容,。海博納新材料科技(蘇州)有限公司歡迎來電

多肽是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物,,是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物。由兩個(gè)氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽,,同理類推還有三肽,、四肽、五肽等,。通常由10~100個(gè)氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,。 肽(peptide)是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物,它也是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物,。 一般肽中含有的氨基酸的數(shù)目為二到九,根據(jù)肽中氨基酸的數(shù)量的不同,肽有多種不同的稱呼:由兩個(gè)氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽,,同理類推還有三肽、四肽,、五肽等,,一直到九肽。通常由10~100個(gè)氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,,它們的分子量低于10,000Da(Dalton,,道爾頓),能透過半透膜,,不被三氯乙酸所沉淀,。也有文獻(xiàn)把由2~10個(gè)氨基酸組成的肽稱為寡肽(小分子肽),;10~50個(gè)氨基酸組成的肽稱為多肽;由50個(gè)以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì),,換言之,,蛋白質(zhì)有時(shí)也被稱為多肽。多肽也簡稱為肽,,是20世紀(jì)被發(fā)現(xiàn)的,。

分離純化多肽的常用方法-疏水作用色譜 HIC 是利用多肽中含有疏水基因,可與固定相之間產(chǎn)生疏水作用而達(dá)到分離分析的目的,,其比RP-GPLC 具有較少使多肽變性的特點(diǎn),。利用GIC 分離生產(chǎn)(GH)產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)與活性比EP-GPLC 分離的要穩(wěn)定,活性較穩(wěn)定,。Geng 等利用HIC 柱的低變性特點(diǎn),,將大腸桿菌表達(dá)出的經(jīng)鹽酸胍乙啶變性得到人重組干擾素-γ。通過HIC 柱純化,、折疊出高生物活性的產(chǎn)品,。不同人尿表皮生長因子(EGF)也利用HIC 純化到了,均具有良好的生物活性,。HIC 可將未經(jīng)離子交換柱的樣品純化,。而RP-HPLC 則不能達(dá)到這一要求。西安口碑好多肽分離填料

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分離純化多肽的常用方法-分子排阻色譜 SEC 是利用多肽分子大小,、形狀差異來分離純化多肽物質(zhì),,特別對一些較大的聚集態(tài)的分子更為方便,如人重組生長(hgH)的分離,,不同結(jié)構(gòu),、構(gòu)型的GH 在SEC 柱上分離行為完全不同,從而可分離不同構(gòu)型或在氨基酸序列上有微小差異的變異體,,利用SEC 研究修飾化的PEG 的分離方法,,此PEC 具有半衰期長、作用強(qiáng)的特點(diǎn),。一些分子量較大的肽或蛋白均可利用此法分離分析,。 分離純化多肽的常用方法--離子交換色譜 IEXC 可在中性條件下,利用多肽的帶電性不同分離純化具有生物活性的多肽,。其可分為陽離子柱與陰離子柱兩大類,,還有一些新型樹脂,如大孔型樹脂,、均孔型樹脂,、離子交換纖維素、葡聚糖凝膠,、瓊脂糖凝膠樹脂等,。在多肽類物質(zhì)的分離分析研究中,對多肽的性質(zhì),、洗脫劑,、洗脫條件的研究較多,不同的多肽分離條件有所不同,,特別是洗脫劑的離子強(qiáng)度,、鹽濃度等對純化影響較大。Wu 等報(bào)道利用離子交換柱層析法,,探討分離牛碳酸酐異構(gòu)體和牛血清白蛋白,、雞血清白蛋白酶的提取條件,獲得了有價(jià)值的數(shù)據(jù)供今后此類物質(zhì)分離研究,。合肥多肽分離填料制造廠家

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