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德國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗哪家好

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-01-13

ePatch雖然設(shè)備非常小巧,,但功能完備,傳統(tǒng)膜片鉗設(shè)備能做的實(shí)驗(yàn),,用ePatch幾乎都能做,。具有voltage-clamp,current-clamp,,zero current-clamp三種模式,,自動(dòng)電極電壓飄移補(bǔ)償,C-fast-C-slow-R-series-P/N補(bǔ)償,,Bridge balance補(bǔ)償?shù)裙δ?。可以做全?xì)胞記錄也可以做單通道記錄,,膜片鉗技術(shù)常做的離子通道電流,,突觸后電流,動(dòng)作電位檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)都能輕松實(shí)現(xiàn),。公司還為此開(kāi)發(fā)了友好的控制和記錄軟件,,筆者上手接觸了一下,發(fā)現(xiàn)跟AXON的軟件類似,,并且程序編輯更為簡(jiǎn)單易用,。所記錄到的數(shù)據(jù)可以直接使用Clampfit進(jìn)行分析,可以說(shuō)對(duì)于使用過(guò)AXON設(shè)備的膜片鉗工作者來(lái)說(shuō),,上手毫無(wú)難度,。由此形成了一門細(xì)胞學(xué)科—電生理學(xué),即是用電生理的方法來(lái)記錄和分析細(xì)胞產(chǎn)生電的大小和規(guī)律的科學(xué),。德國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗哪家好

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高阻封接問(wèn)題的解決不僅改善了電流記錄性能,,還隨之出現(xiàn)了研究通道電流的多種膜片鉗方式,。根據(jù)不同的研究目的,,可制成不同的膜片構(gòu)型,。細(xì)胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細(xì)胞膜表面上,形成高阻封接,,在細(xì)胞膜表面隔離出一小片膜,,既而通過(guò)微管電極對(duì)膜片進(jìn)行電壓鉗制,分辨測(cè)量膜電流,,稱為細(xì)胞貼附膜片,。由于不破壞細(xì)胞的完整性,這種方式又稱為細(xì)胞膜上的膜片記錄,。此時(shí)跨膜電位由玻管固定電位和細(xì)胞電位決定,。因此,為測(cè)定膜片兩側(cè)的電位,,需測(cè)定細(xì)胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動(dòng)看,,這種形式的膜片是極穩(wěn)定的,,因細(xì)胞骨架及有關(guān)代謝過(guò)程是完整的,所受的干擾小,。德國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗哪家好而由通道蛋白介導(dǎo)的膜電導(dǎo)構(gòu)成了膜反應(yīng)的主動(dòng)成分,,它的電流電壓關(guān)系是非線性的。

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膜片鉗技術(shù)發(fā)展至今,,已經(jīng)成為現(xiàn)代細(xì)胞電生理的常規(guī)方法,,它不僅可以作為基礎(chǔ)生物醫(yī)學(xué)研究的工具,而且直接或間接為臨床醫(yī)學(xué)研究服務(wù),。目前膜片鉗技術(shù)廣泛應(yīng)用于神經(jīng)(腦)科學(xué),、心血管科學(xué)、藥理學(xué),、細(xì)胞生物學(xué),、病理生理學(xué)、中醫(yī)藥學(xué),、植物細(xì)胞生理學(xué),、運(yùn)動(dòng)生理等多學(xué)科領(lǐng)域研究,。隨著全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)(Automaticpatchclamptechnology)的出現(xiàn),膜片鉗技術(shù)因其具有的自動(dòng)化,、高通量特性,,在藥物研發(fā)、藥物篩選中顯示了強(qiáng)勁的生命力,。

不同的全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)所采用的原理如PopulationPatchClamp技術(shù)∶同SealChip技術(shù)一樣,,完全摒齊了玻璃電極,而是采用PatchPlate平面電極芯片,。該芯片含有多個(gè)小室,,每個(gè)小室中含有很多1-2μm的封接孔。在記錄時(shí),,每個(gè)小室中封接成功的細(xì)胞|數(shù)目較多,,獲得的記錄是這些細(xì)胞通道電流的平均值。因此,,不同小室其通道電流的一致性非常好,,變異系數(shù)很小。美國(guó)Axon(MDS)公司采用這一技術(shù)研發(fā)出了全自動(dòng)高通量的lonWorksQuattro系統(tǒng),,成為藥物初期篩選的金標(biāo)準(zhǔn)在膜電位改變時(shí),,在電場(chǎng)的作用下,重新分布導(dǎo)致通道的關(guān)閉,,同時(shí)有電荷移動(dòng),,稱為門控電流。

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1980年,,Sigworth,、Hamill、Neher等在記錄電極內(nèi)施加負(fù)壓吸引,,得到了10~100GΩ的高阻封接(gigaseal),,降低記錄噪聲,實(shí)現(xiàn)了單根電極既鉗制膜電位又記錄單通道電流,。獲1991年Nobel獎(jiǎng),。1955年,Hodgkin和Keens應(yīng)用電壓鉗(Voltageclap)在研究神經(jīng)軸突膜對(duì)鉀離子通透性時(shí)發(fā)現(xiàn)放射性鉀跨軸突膜的運(yùn)動(dòng)很像是通過(guò)許多狹窄空洞的運(yùn)動(dòng),,并提出了"通道"的概念,。1963年,描述電壓門控動(dòng)力學(xué)的Hodgkin-Hx上模型(簡(jiǎn)稱H-H模型)榮獲譜貝爾醫(yī)學(xué)/生理學(xué)獎(jiǎng),。1976年,,Neher和Sakmann建立膜片鉗(Patchclamp)按術(shù)。1983年10月,,《Single-ChannelRecording》一書(shū)問(wèn)世,,奠定了膜片鉗技術(shù)的里程碑,。1991年,Neher和Sakmann的膜片鋪技術(shù)榮獲諾貝爾醫(yī)學(xué)/生理學(xué)獎(jiǎng),。脂質(zhì)層電導(dǎo)很低,,由于雙分子層的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),形成了細(xì)胞的膜電容,,通道蛋白開(kāi)閉狀況主要決定了膜電導(dǎo)的數(shù)值,。進(jìn)口腦片膜片鉗多少錢

對(duì)離子通道功能的研究,主要采用記錄離子通道電流來(lái)間接反映離子通道功能,。德國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗哪家好

膜片鉗技術(shù)原理:膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個(gè)離子通道,、面積為幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜通過(guò)負(fù)壓吸引封接起來(lái)(見(jiàn)右圖),由于電極前列與細(xì)胞膜的高阻封接,,在電極前列籠罩下的那片膜事實(shí)上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離,,因此,此片膜內(nèi)開(kāi)放所產(chǎn)生的電流流進(jìn)玻璃吸管,,用一個(gè)極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測(cè)量此電流強(qiáng)度,,就單一離子通道電流膜片鉗技術(shù)的建立,對(duì)生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革,。這是一種以記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的(或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù),。些技術(shù)的出現(xiàn)自然將細(xì)胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起,同時(shí)又將神經(jīng)科學(xué)的不同分野必然地融匯在一起,,改變了既往各個(gè)分野互不聯(lián)系,、互不滲透,阻礙人們較全認(rèn)識(shí)能力的弊端,。這一技術(shù)的發(fā)現(xiàn)和基因克隆技術(shù)并架齊驅(qū),,給生命科學(xué)研究帶來(lái)了巨大的前進(jìn)動(dòng)力。德國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗哪家好

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