與普通顯微鏡相比,，電子顯微鏡可以在更小的尺度上觀察事物，冷凍電子顯微鏡可以觀察活性生物大分子,。雙光子顯微鏡有什么優(yōu)勢(shì),？它能做普通光學(xué)顯微鏡做不到的事情嗎,？原來雙光子顯微鏡可以準(zhǔn)確穿透厚標(biāo)本進(jìn)行定點(diǎn)和***觀察！因?yàn)殡姶挪ǖ牟ㄩL(zhǎng)越短,，粒子越強(qiáng),，散射的影響越大。雙光子顯微鏡將激發(fā)光源改為長(zhǎng)波長(zhǎng)激光,，增加了激光的穿透力,，同時(shí)降低了對(duì)細(xì)胞的毒性。此外,，由于雙光子激發(fā)效應(yīng)只能發(fā)生在物鏡的焦點(diǎn)處,，因此掃描精度極高，還可以提高激發(fā)光效率,，減少掃描點(diǎn)以外的熒光物質(zhì)的消耗,。雙光子顯微鏡供應(yīng)商找因斯蔻浦(上海)生物科技有限公司。國(guó)外2PPLUS雙光子顯微鏡熒光探測(cè)

從雙光子的原理和特點(diǎn)我們就可以明顯的得出雙光子的優(yōu)點(diǎn)：☆穿透能力強(qiáng)：相對(duì)于紫外光,，可見光和近紅外光都具有更強(qiáng)的穿透能力,，因而受生物組織散射的影響更小，解決對(duì)生物組織中深層物質(zhì)的層析成像研究問題,；☆高分辨率：由于雙光子吸收截面很小,，只有在焦平面很小的區(qū)域內(nèi)可以激發(fā)出熒光，雙光子吸收局限于焦點(diǎn)處的體積約為波長(zhǎng)3次方的范圍內(nèi),；☆漂白區(qū)域?。河捎诩ぐl(fā)只存在于交點(diǎn)處，所以焦點(diǎn)以外的區(qū)域都不會(huì)發(fā)生光漂白現(xiàn)象,；☆熒光收集率高：與共聚焦成像相比,，雙光子成像不需要光學(xué)濾波器（共焦），這樣就提高了對(duì)熒光的收集率,，而收集率的提高直接導(dǎo)致圖像對(duì)比度的提高,。國(guó)外ultima2PPLUS雙光子顯微鏡廠家電話優(yōu)勢(shì)來源于其雙光子光源的非線性光學(xué)效應(yīng)。

WinfriedDenk使用的第1個(gè)光源是染料飛秒激光(脈沖寬度100fs,，可見光波長(zhǎng)630nm),。染料激光雖然實(shí)驗(yàn)室演示可以接受，但是使用起來不方便,，所以離商業(yè)化還很遠(yuǎn),。很快雙光子顯微鏡的標(biāo)準(zhǔn)光源變成了飛秒鈦寶石激光器。鈦寶石激光器除了具有固態(tài)光源的優(yōu)點(diǎn)外,，還具有近紅外波長(zhǎng)調(diào)諧范圍寬,，而近紅外比可見光穿透更深，對(duì)生物樣品的損傷更小。下圖是Thorlabs的雙光子和三光子顯微鏡配置,，鈦寶石飛秒可調(diào)諧激光器位于平臺(tái)左側(cè),。從雙光子到三光子科學(xué)家們正在從雙光子顯微鏡轉(zhuǎn)向三光子顯微鏡。1996年,，ChrisXu在康奈爾大學(xué)(Denk的導(dǎo)師實(shí)驗(yàn)室)讀博時(shí)發(fā)明了三光子顯微鏡,。如果雙光子吸收是可行的，那么三光子似乎是自然的發(fā)展方向,。三光子成像使用更長(zhǎng)的波長(zhǎng),，大約1.3和1.7微米，成像深度比雙光子更深,。目前錄音大約2.2毫米,，人的大腦皮層厚度大約4毫米。與雙光子顯微鏡相比,，三光子需要使用更強(qiáng),、更短、重復(fù)率更低的激光脈沖,，這是傳統(tǒng)的鈦寶石激光器很難滿足的,，但對(duì)于摻鐿光纖飛秒光參量放大器，比如我們的Y-Fi光參量放大器(OPA)就非常容易,。

雙光子顯微鏡是一種先進(jìn)的成像技術(shù),，能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)胞或組織的深層觀察。它的主要特點(diǎn)是使用雙光子激發(fā)來產(chǎn)生熒光,，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)生物樣品的高分辨率成像,。雙光子顯微鏡的工作原理是利用激光的脈沖寬度極窄的特性，將高能激光束聚焦到生物樣品中,，激發(fā)出熒光,。這個(gè)過程需要使用一個(gè)特殊的雙光子激發(fā)源，它能夠?qū)⒁粋€(gè)光子轉(zhuǎn)換為兩個(gè)光子,，其中一個(gè)光子用于激發(fā)熒光,，另一個(gè)光子則用于成像。雙光子顯微鏡具有以下優(yōu)點(diǎn)：高分辨率：由于雙光子激發(fā)的特性,，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)生物樣品的高分辨率成像，特別是對(duì)于深層組織的觀察,。穿透深度大：雙光子激光的波長(zhǎng)較長(zhǎng),，能夠更好地穿透生物組織，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)深層細(xì)胞的觀察,。熒光壽命長(zhǎng)：雙光子激發(fā)產(chǎn)生的熒光壽命比單光子激發(fā)產(chǎn)生的熒光壽命長(zhǎng),，這使得雙光子顯微鏡能夠更好地區(qū)分不同的熒光標(biāo)記物。減少光毒性：由于雙光子激發(fā)的能量較低，因此對(duì)生物樣品的損傷較小,，可以減少光毒性,。總之,，雙光子顯微鏡是一種非常有用的成像技術(shù),，可以用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué),、材料科學(xué)等領(lǐng)域的研究,。雙光子顯微鏡在各領(lǐng)域研究中已有許多成功實(shí)例。

雙光子熒光顯微鏡是結(jié)合了激光掃描共聚焦顯微鏡和雙光子激發(fā)技術(shù)的一種新技術(shù),。雙光子激發(fā)的基本原理是：在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時(shí)吸收2個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)的光子，在經(jīng)過一個(gè)很短的所謂激發(fā)態(tài)壽命的時(shí)間后,，發(fā)射出一個(gè)波長(zhǎng)較短的光子,；其效果和使用一個(gè)波長(zhǎng)為長(zhǎng)波長(zhǎng)一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的。雙（多）光子成像優(yōu)勢(shì)在于,，具有更深的組織穿透深度,，利用紅外光，能夠在層面檢測(cè)極限達(dá)1mm的組織區(qū)域,；因信號(hào)背景比高,，而具有更高的對(duì)比度；因激發(fā)體積小,，具有定點(diǎn)激發(fā)的特性,，具有更少的光毒性；激發(fā)波長(zhǎng)由紫外,、可見光調(diào)整為紅外激發(fā),，使其能夠更加安全。雙光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為光源,。美國(guó)ultimainvestigator雙光子顯微鏡原理

雙光子顯微鏡有哪些分類呢,？國(guó)外2PPLUS雙光子顯微鏡熒光探測(cè)

配合雙光子激發(fā)技術(shù)，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效,。那么,，什么是雙光子激發(fā)技術(shù)呢？在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時(shí)吸收2個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)的光子使電子躍遷到較高能級(jí),，經(jīng)過一個(gè)很短的時(shí)間后，電子再躍遷回低能級(jí)同時(shí)放出一個(gè)波長(zhǎng)為長(zhǎng)波長(zhǎng)一半的光子（P=h/λ）,。利用這個(gè)原理,，便誕生了雙光子激發(fā)技術(shù),。雙光子顯微鏡使用長(zhǎng)波長(zhǎng)脈沖激光，通過物鏡匯聚,，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,，而物鏡焦點(diǎn)處的光子密度是比較高的，所以只有在焦點(diǎn)處才能發(fā)生雙光子激發(fā),，產(chǎn)生熒光,，該點(diǎn)產(chǎn)生的熒光再次穿過物鏡，被光探頭接收,，從而達(dá)到逐點(diǎn)掃描的效果,。國(guó)外2PPLUS雙光子顯微鏡熒光探測(cè)