通過對微型光學系統(tǒng)的重新設計,，F(xiàn)HIRM-TPM2.0成像視野擴大至420×420平方微米，微型物鏡的工作距離擴展至1毫米,，以實現(xiàn)非侵入式成像,；嵌入了可拆卸的快速軸向掃描模塊，實現(xiàn)了180微米深度的三維體成像和多平面快速切換的實時成像,。該模塊由一個快速的電動變焦透鏡和一對中繼透鏡組成,，在不同深度成像時保持放大倍率恒定。其中,，變焦模塊重量1.8克,，研究人員可根據(jù)實驗需求自由拆卸,。此外，新版微型化成像探頭還可整體即時拔插,，極大地簡化了實驗操作,，避免了長周期實驗時對動物的干擾。在重復裝卸探頭追蹤同一批神經(jīng)元時,，視場旋轉角小于0.07弧度,，邊界偏差小于35微米。雙光子顯微鏡明日之星--FemtoFiber ultra 920 ,。美國激光雙光子顯微鏡最大分辨率

細胞內(nèi)鈣離子作為重要的信號分子其作用具有時間性和空間性,。當個細胞興奮時，產(chǎn)生了一個電沖動,，此時,，細胞外的鈣離子流入該細胞內(nèi)，促使該細胞分泌神經(jīng)遞質(zhì),，神經(jīng)遞質(zhì)與相鄰的下一級神經(jīng)細胞膜上的蛋白分子結合,，促使這一級神經(jīng)細胞產(chǎn)生新的電沖動。以此類推,，神經(jīng)信號便一級一級地傳遞下去,，從而構成復雜的信號體系，終形成學習,、記憶等大腦的高級功能,。在哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)中，鈣離子同樣扮演著重要的信號分子的角色,。靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細胞內(nèi)鈣離子濃度約為50-100nM,，而細胞興奮時鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍，增加的鈣離子對于突觸囊泡胞吐釋放神經(jīng)遞質(zhì)的過程必不可少,。眾所周知,，只有游離鈣才具有生物學活性，而細胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定,，同時也受鈣結合蛋白的影響,。細胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種，其中包括電壓門控鈣離子通道,、離子型谷氨酰胺受體,、煙堿型膽堿能受體（nAChR）和瞬時受體電位C型通道（TRPC）等。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強度表現(xiàn)出來,，以反映神經(jīng)元活性,。該方法可以同時觀察多個功能或位置相關的腦細胞。ultimainvestigator雙光子顯微鏡光子探測雙光子顯微鏡的探測器,該怎么選用?

在傳統(tǒng)寬場顯微鏡中，來自標本不同縱深的光線都可投射到同一焦平面（感光元件）上,，所以其成像是整個樣品的重疊像,，沒有縱向分辨能力。單光子激光共聚焦顯微鏡用***有效濾除了雜散光,，分辨率有了本質(zhì)上的提高，擁有了對樣品的特定焦平面精細成像的能力,，可以進行三維成像,、動態(tài)成像等。然而,，***在濾除雜散光的同時也將大部分來自焦平面的熒光濾除了,，只有很弱的熒光到達檢測器。若要提高信號強度,，需要加大激發(fā)光功率,，這又會導致對活細胞的光毒性和熒光分子的光漂白增加。雙光子顯微鏡比較大的優(yōu)勢來源于其雙光子光源的非線性光學效應,，與單光子共聚焦顯微鏡比較大的不同在于無須使用***限制光學散射,，其具體優(yōu)勢如下。

共聚焦顯微可以呈現(xiàn)這么漂亮的圖像,，是不是什么樣品都可以用共聚焦顯微鏡拍拍拍.....得到各種各樣清晰漂亮的圖像呢,？答案是否定的，任何事物都有優(yōu)缺點,，何況一臺儀器呢,，共聚焦顯微鏡也是有自己的局限,共聚焦有哪些局限呢：1.共聚焦顯微鏡只能拍攝約200um以內(nèi)的的樣品，對于厚的或者樣品不能進拍攝,；2.共聚焦顯微鏡由于是逐點進行掃描,，對樣品的光毒性還是比較大的，特別是拍攝活細胞樣品時就更容易對樣品進行淬滅,；3.由于光照射的區(qū)域幾乎能通過這個Z軸的層面,，所以對于空間定點光刺激的實驗定點位置就不是特別精確；并且激光共聚焦顯微鏡沒有純紫外進行激發(fā),，對于一些特殊激發(fā)波長的實驗,，效率非常低。雙光子顯微鏡可精確穿透較厚標本進行定點,、有生命體的觀察,！

從雙光子的原理和特點我們就可以明顯的得出雙光子的優(yōu)點：☆光損傷小：由于雙光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為激發(fā)光源,，這一波段的光對***細胞和組織的光損傷小,，適用于長時間的研究；☆穿透能力強：相對于紫外光，可見光和近紅外光都具有更強的穿透能力,，因而受生物組織散射的影響更小,，解決對生物組織中深層物質(zhì)的層析成像研究問題；☆高分辨率：由于雙光子吸收截面很小,，只有在焦平面很小的區(qū)域內(nèi)可以激發(fā)出熒光,，雙光子吸收只局限于焦點處的體積約為波長3次方的范圍內(nèi)；☆漂白區(qū)域?。河捎诩ぐl(fā)只存在于交點處,，所以焦點以外的區(qū)域都不會發(fā)生光漂白現(xiàn)象；☆熒光收集率高：與共聚焦成像相比,，雙光子成像不需要光學濾波器（共焦***）,，這樣就提高了對熒光的收集率，而收集率的提高直接導致圖像對比度的提高,；☆圖像對比度高：由于熒光波長小于入射波長,，因而瑞利散射產(chǎn)生的背景噪聲只有單光子激發(fā)時的1/16，較大降低了散射的干擾,；☆光子躍遷具有很強的選擇激發(fā)性,，所以可以對生物組織中一些特殊物質(zhì)進行成像研究；雙光子顯微鏡的原理是什么,？國內(nèi)雙光子顯微鏡商家電話

雙光子顯微鏡可以進行厚的組織樣品拍攝,。美國激光雙光子顯微鏡最大分辨率

雙光子顯微鏡的優(yōu)勢相比普通的顯微鏡電子顯微鏡可以觀察尺度更小的東西，冷凍電鏡更是可以觀察有活性的生物大分子,，而雙光子顯微鏡有什么優(yōu)勢呢,？它能做到什么普通光學顯微鏡做不到的事情嗎？原來,，雙光子顯微鏡可以精確穿透較厚標本進行定點,、觀察！由于電磁波的波長越短,，粒子性越強,，受散射影響也就越大。雙光子顯微鏡將激發(fā)光源改為長波長激光,，在增加了激光的穿透性的同時還減少了對細胞的毒性,。除此之外，因為只有物鏡焦點處能發(fā)生雙光子激發(fā)效應,，所以掃描的精確度極高,，也能提高激發(fā)光效率，減少被掃描點之外的熒光物質(zhì)消耗,。美國激光雙光子顯微鏡最大分辨率