TOPTICAFemtoFiberultra920超快光纖激光器是一種易于操作和免維護(hù)的激光系統(tǒng)其輸出波長(zhǎng)為920nm,，非常適合常規(guī)熒光基團(tuán)(如GFP,、eGFP,、曙紅,、GCaMP、CFP,、鈣黃綠素或金星)的雙光子激發(fā),。它可以為熒光基團(tuán)提供相對(duì)較高的峰值功率,，常用于神經(jīng)科學(xué)和其他與激光相關(guān)的光子學(xué),。此外,，其獨(dú)特的設(shè)計(jì)(簡(jiǎn)單和經(jīng)濟(jì)的光源)具有創(chuàng)新雙光子熒光顯微鏡發(fā)展的潛力。在雙光子顯微鏡中,，峰值功率就是亮度,！如果你想獲得更好的圖像亮度,，那么你需要短脈沖,，高功率，更重要的是,，干凈的時(shí)間脈沖形狀,。FemtoFiberultra920具有足夠高的輸出功率,、短脈沖,、獨(dú)特的Clean-Pulse技術(shù)和相對(duì)較高的峰值功率，這使得在雙光子顯微鏡中實(shí)現(xiàn)****亮度而無(wú)需對(duì)樣品進(jìn)行不必要的加熱成為可能,。FemtoFiberultra920全包式,、完全集成的色散補(bǔ)償(可確保樣品處的短脈沖),、內(nèi)置電源控制,、直觀的操作及其堅(jiān)固緊湊的設(shè)計(jì)使系統(tǒng)具有非常友好的用戶體驗(yàn),，是非線性顯微鏡應(yīng)用的良好解決方案,。例如,，熒光蛋白的雙光子激發(fā)和基于SHG的對(duì)比機(jī)制雙光子顯微鏡在組織透明化成像中應(yīng)用。國(guó)外雙光子顯微鏡廠家電話

隨著技術(shù)的發(fā)展,，雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優(yōu)化，結(jié)合它的特點(diǎn),，大致可以分成深和活兩個(gè)方面的提升,。要想讓激發(fā)激光進(jìn)入更深的層面，大致可從兩個(gè)方面入手,，裝置優(yōu)化與標(biāo)本改造,。關(guān)于裝置優(yōu)化,，我們可以把激光束變得更細(xì),，使能量更加集中,，就能讓激光穿透更深。關(guān)于標(biāo)本,，其中影響光傳播的主要是物質(zhì)吸收和散射,，解決這個(gè)問題，我們需要對(duì)樣本進(jìn)行透明化處理,。一種方法是運(yùn)用某種物質(zhì)將標(biāo)本浸泡,，使其中的物質(zhì)（主要是脂質(zhì)）被破壞或溶解。另一種方法是運(yùn)用電泳將脂質(zhì)電解,，進(jìn)而讓標(biāo)本“透明度”提高,。國(guó)內(nèi)布魯克雙光子顯微鏡廠家雙光子顯微鏡是新型的熒光顯微鏡,，其原理大致是這樣的；

雙光子吸收理論早在1931年就由諾獎(jiǎng)得主MariaGoeppertMayer提出,，30年后因?yàn)橛辛思す獠诺玫綄?shí)驗(yàn)驗(yàn)證,，但是到WinfriedDenk發(fā)明雙光子顯微鏡又用了將近30年。要理解雙光子的技術(shù)挑戰(zhàn)和飛秒激光發(fā)揮的重要作用,，首先要了解其中的非線性過程,。雙光子吸收相當(dāng)于和頻產(chǎn)生非線性過程，這要求極高的電場(chǎng)強(qiáng)度,，而電場(chǎng)取決于聚焦光斑大小和激光脈寬,。聚焦光斑越小，脈寬越窄,，雙光子吸收效率越高,。對(duì)于衍射極限顯微鏡，聚焦在樣品上的光斑大小只和物鏡NA和激光波長(zhǎng)有關(guān),，所以關(guān)鍵變量只剩下激光脈寬,。基于以上分析,，能夠以高重頻(100MHz)輸出超短脈沖(100fs量級(jí))的飛秒激光器成了雙光子顯微鏡的標(biāo)準(zhǔn)激發(fā)光源,。這也再次說明雙光子顯微鏡的優(yōu)勢(shì)：只有焦平面處才能形成雙光子吸收，而焦平面之外由于光強(qiáng)低無(wú)法被激發(fā),，所以雙光子成像更清晰,。WinfriedDenk初使用的光源是染料飛秒激光器(100fs脈寬、630nm可見光波長(zhǎng)),。雖然染料激光器對(duì)于實(shí)驗(yàn)室演示尚可,，但是使用很不方便所以遠(yuǎn)未實(shí)現(xiàn)商用。很快雙光子顯微鏡的標(biāo)配光源就變成了飛秒鈦寶石激光器,。除了固態(tài)光源優(yōu)勢(shì),，鈦寶石激光器還具有較寬的近紅外波長(zhǎng)調(diào)諧范圍，而近紅外相比可見光穿透更深,，對(duì)生物樣品損傷更小,。

隨著技術(shù)的發(fā)展，雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優(yōu)化,，結(jié)合它的特點(diǎn),，大致可以分成深和活兩個(gè)方面的提升。要想讓激發(fā)激光進(jìn)入更深的層面,，大致可從兩個(gè)方面入手,，裝置優(yōu)化與標(biāo)本改造。關(guān)于裝置優(yōu)化,，我們可以把激光束變得更細(xì),，使能量更加集中,，就能讓激光穿透更深。關(guān)于標(biāo)本,，其中影響光傳播的主要是物質(zhì)吸收和散射,，解決這個(gè)問題，我們需要對(duì)樣本進(jìn)行透明化處理,。一種方法是運(yùn)用某種物質(zhì)將標(biāo)本浸泡,，使其中的物質(zhì)（主要是脂質(zhì)）被破壞或溶解。另一種方法是運(yùn)用電泳將脂質(zhì)電解,，讓標(biāo)本的“透明度”提高,。如果已經(jīng)有了飛秒光，就可以幾套雙光子顯微鏡共享一臺(tái),，只需分光即可,。

首先，雙光子成像采用波長(zhǎng)范圍約在700~1000nm的近紅外光激發(fā),，在組織中的散射系數(shù)較小,，穿透性很好，因此非常適合厚樣本的觀察,。同時(shí),，由于是近紅外光激發(fā)，也能避免樣品中激發(fā)波長(zhǎng)較短的自發(fā)熒光物質(zhì)的干擾,，可獲得較強(qiáng)的熒光信號(hào)（如下圖）,。所以雙光子成像具有較深的穿透力和較小的光毒性。通常在活物腦組織中雙光子顯微鏡有效成像深度可達(dá)200~500μm,，能夠較好地進(jìn)行三維成像,。雙光子成像的另一大優(yōu)勢(shì)在于精確的空間點(diǎn)聚焦性,。一般條件下,，物質(zhì)只會(huì)被單光子激發(fā)，只有在光子密度足夠高的情況下,，物質(zhì)才會(huì)吸收兩個(gè)光子從而被激發(fā),，所以，雙光子只會(huì)在光子密度蕞高的物鏡焦點(diǎn)附近發(fā)生,，很少產(chǎn)生焦平面外的雜散光（如下圖）,。這種性質(zhì)既提高了成像質(zhì)量，也降低了樣本的光漂白,、光損傷區(qū)域,。基于這些優(yōu)勢(shì),，使得雙光子顯微鏡非常適合對(duì)活細(xì)胞,、活組織進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間在體成像,。雙光子顯微鏡中，同樣每個(gè)時(shí)刻只有焦平面上一個(gè)點(diǎn)的信號(hào)被探測(cè),，并且連焦平面外的熒光信號(hào)也不會(huì)有,。國(guó)內(nèi)熒光雙光子顯微鏡光子探測(cè)

雙光子顯微鏡明日之星--FemtoFiber ultra 920 。國(guó)外雙光子顯微鏡廠家電話

基因編碼的熒光探針可用于在突觸和細(xì)胞分辨率下監(jiān)測(cè)體內(nèi)神經(jīng)元信號(hào),，這是揭示動(dòng)物神經(jīng)活動(dòng)復(fù)雜機(jī)制的關(guān)鍵,。雙光子顯微鏡(2PM)可以對(duì)鈣離子傳感器和谷氨酸傳感器進(jìn)行亞細(xì)胞分辨率的成像，從而測(cè)量不透明腦深部的活動(dòng),。成像膜的電壓變化可以直接反映神經(jīng)元的活動(dòng),，但神經(jīng)元活動(dòng)的速度對(duì)于常規(guī)的2PM來說太快了。目前,，電壓成像主要由寬視場(chǎng)顯微鏡實(shí)現(xiàn),，但其空間分辨率較差，且只能在淺深度成像,。因此,，為了以高空間分辨率成像不透明腦中膜電壓的變化，需要將成像速率提高2PM,。面向模塊輸出端的子脈沖序列可視為從虛擬光源陣列發(fā)出的光,，這些子脈沖在中繼到顯微鏡物鏡后形成空間分離和時(shí)間延遲的聚焦陣列。然后,，該模塊被集成到一個(gè)帶有高速數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)雙光子熒光顯微鏡中,，如圖2所示。光源是重復(fù)頻率為1MHz的920nm激光器,。FACED模塊可以產(chǎn)生80個(gè)脈沖焦點(diǎn),，脈沖時(shí)間間隔為2ns。這些焦點(diǎn)是虛擬源的圖像,。虛光源越遠(yuǎn),，物鏡處的光束尺寸越大，焦點(diǎn)越小,。光束可以沿Y軸比沿X軸更好地填充物鏡,，從而在X軸上產(chǎn)生0.82m和0.35m的橫向分辨率。國(guó)外雙光子顯微鏡廠家電話