通過對顯微光學系統(tǒng)的重新設計,，將FHIRM-TPM2.0的成像視場擴展至420×420平方微米，顯微物鏡的工作距離擴展至1mm,，實現(xiàn)無創(chuàng)成像,。嵌入可拆卸的快速軸向掃描模塊，實現(xiàn)深度180微米的三維體成像和多平面快速切換的實時成像,。該模塊由一個快速電動變焦鏡頭和一對中繼鏡頭組成,，在不同深度成像時保持放大率恒定。其中,，變焦模塊重1.8克,，科研人員可以根據(jù)實驗要求自由拆卸,。此外,，新型微型成像探頭可以瞬間插拔，極大簡化了實驗操作,，避免了長時間實驗對動物的干擾,。反復裝卸探針追蹤同批神經(jīng)元時，視場旋轉(zhuǎn)角度小于0.07弧度,，邊界偏差小于35微米,。雙光子顯微鏡將得到更大的發(fā)展與更廣的應用。國內(nèi)布魯克雙光子顯微鏡商家電話

WinfriedDenk較初使用的光源是染料飛秒激光器(100fs脈寬,、630nm可見光波長),。雖然染料激光器對于實驗室演示尚可，但是使用很不方便所以遠未實現(xiàn)商用,。很快雙光子顯微鏡的標配光源就變成了飛秒鈦寶石激光器,。除了固態(tài)光源優(yōu)勢，鈦寶石激光器還具有較寬的近紅外波長調(diào)諧范圍,，而近紅外相比可見光穿透更深,，對生物樣品損傷更小。下圖是Thorlabs的雙光子和三光子顯微鏡配置,，鈦寶石飛秒可調(diào)諧激光器位于平臺較左邊,。科學家正在從雙光子轉(zhuǎn)向三光子顯微鏡,。1996年,，ChrisXu在康奈爾大學(Denk同導師實驗室)讀博期間發(fā)明了三光子顯微鏡，如果雙光子吸收可行,，那么三光子看起來也是自然的發(fā)展方向,。三光子成像使用更長的波長，大約在1.3和1.7微米,，其成像深度也比雙光子更深,，目前記錄約為2.2毫米,，人類大腦皮層厚約4毫米。相比雙光子顯微鏡,，三光子還要求以較低重頻使用更強和更短的激光脈沖,，而傳統(tǒng)的鈦寶石激光器難以達到這些要求，但是對于摻鐿光纖飛秒光參量放大器則非常容易,，比如我們的Y-Fi光參量放大器(OPA),。進口ultimainvestigator雙光子顯微鏡成像原理雙光子顯微鏡已延伸到各個領域研究中，它能對樣品進行三維觀察,。

配合雙光子激發(fā)技術,，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效。那么,，什么是雙光子激發(fā)技術呢,？在高光子密度的情況下，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子使電子躍遷到較高能級,，經(jīng)過一個很短的時間后,，電子再躍遷回低能級同時放出一個波長為長波長一半的光子（P=h/λ）。利用這個原理,，便誕生了雙光子激發(fā)技術,。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光，通過物鏡匯聚,，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,，而物鏡焦點處的光子密度是比較高的，所以只有在焦點處才能發(fā)生雙光子激發(fā),，產(chǎn)生熒光,，該點產(chǎn)生的熒光再穿過物鏡，被光探頭接收,，從而達到逐點掃描的效果,。

微型化雙光子熒光顯微成像改變了在自由活動動物中觀察細胞和亞細胞結構的方式，可用于在動物覓食,、哺乳,、跳臺、打斗,、嬉戲,、睡眠等自然行為條件下，長時程觀察神經(jīng)突觸,、神經(jīng)元,、神經(jīng)網(wǎng)絡、遠程連接的腦區(qū)等多尺度,、多層次動態(tài)變化,。該成果在2016年底美國神經(jīng)科學年會,、2017年5月冷泉港亞洲腦科學專題會議上報告后，得到包括多位諾貝爾獎獲得者在內(nèi)的國內(nèi)外神經(jīng)科學家的高度贊譽,。冷泉港亞洲腦科學專題會議,、美國明顯神經(jīng)科學家加州大學洛杉磯分校的AlcinoJSilva教授在評述中寫道，“從任何一個標準來看,，這款顯微鏡都了一項重大技術發(fā)明,，必將改變我們在自由活動動物中觀察細胞和亞細胞結構的方式。它所開啟的大門,，甚至超越了神經(jīng)元和樹突成像,。系統(tǒng)神經(jīng)生物學正在進入一個新的時代，即通過對細胞群體中可辨識的細胞和亞細胞結構的復雜生物學事件進行成像觀測,。雙光子顯微鏡放大倍數(shù)是多少,？

相比普通的顯微鏡電子顯微鏡可以觀察尺度更小的東西，冷凍電鏡更是可以觀察有活性的生物大分子,，而雙光子顯微鏡有什么優(yōu)勢呢,？它能做到什么普通光學顯微鏡做不到的事情嗎,？原來,，雙光子顯微鏡可以精確穿透較厚標本進行定點、***觀察,！由于電磁波的波長越短,，粒子性越強，受散射影響也就越大,。雙光子顯微鏡將激發(fā)光源改為長波長激光,，在增加了激光的穿透性的同時還減少了對細胞的毒性。除此之外,，因為只有物鏡焦點處能發(fā)生雙光子激發(fā)效應,，所以掃描的精確度極高，也能提高激發(fā)光效率,，減少被掃描點之外的熒光物質(zhì)消耗,。雙光子顯微鏡在各領域研究中已有許多成功實例。進口ultimainvestigator雙光子顯微鏡成像原理

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而配合了雙光子激發(fā)技術,，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效。那么,，什么是雙光子激發(fā)技術呢,？在高光子密度的情況下，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子使電子躍遷到較高能級,，經(jīng)過一個很短的時間后,，電子再躍遷回低能級同時放出一個波長為長波長一半的光子（P=h/λ）,。利用這個原理，便誕生了雙光子激發(fā)技術,。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光,，通過物鏡匯聚，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,，而物鏡焦點處的光子密度是比較高的,，所以只有在焦點處才能發(fā)生雙光子激發(fā)，產(chǎn)生熒光,，該點產(chǎn)生的熒光再穿過物鏡,，從而被光探頭接收，從而達到逐點掃描的效果,。國內(nèi)布魯克雙光子顯微鏡商家電話