從雙光子的原理和特點(diǎn),，我們可以清楚地得出雙光子的優(yōu)點(diǎn):☆光損傷小:由于雙光子顯微鏡采用可見光或近紅外光作為激發(fā)光源，因此該波段的光對(duì)細(xì)胞和組織的光損傷很小,，適合長(zhǎng)期研究,；☆穿透能力強(qiáng):與紫外光相比，可見光和近紅外光的穿透能力更強(qiáng),，因此受生物組織散射的影響更小,，解決了生物組織深層物質(zhì)的層析成像問題；☆高分辨率:由于雙光子吸收的截面很小,，只能在焦平面很小的區(qū)域激發(fā)熒光,，雙光子吸收被限制在焦點(diǎn)處體積約為波長(zhǎng)三次方的范圍內(nèi)；☆漂白區(qū)域小:由于激發(fā)只存在于交點(diǎn)處,，焦點(diǎn)外的區(qū)域不會(huì)發(fā)生光漂白,；☆熒光收集率高:與共焦成像相比，雙光子成像不需要濾光片(共焦),，提高了熒光收集率,，直接導(dǎo)致圖像對(duì)比度的提高；☆圖像對(duì)比度高:由于熒光波長(zhǎng)小于入射波長(zhǎng),，瑞利散射產(chǎn)生的背景噪聲*為單光子激發(fā)產(chǎn)生的1/16,，減少了散射的干擾；光子躍遷具有很強(qiáng)的選擇性激發(fā),，因此可以用來對(duì)生物組織中的一些特殊物質(zhì)進(jìn)行成像,；雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖器。進(jìn)口investigator雙光子顯微鏡熒光壽命計(jì)數(shù)

首先我們來簡(jiǎn)單介紹一下激光掃描共聚焦和雙光子這兩種當(dāng)紅的顯微成像技術(shù),。激光掃描共聚焦顯微技術(shù),，是熒光顯微成像的一種，用于激發(fā)樣品的熒光信號(hào)并對(duì)其放大成像,。在激光掃描共聚焦顯微鏡中,，樣品焦平面上每一時(shí)刻只有一個(gè)點(diǎn)被激發(fā)光照射，縱然焦平面外也有激發(fā)光照射，但通過探測(cè)器前的（pinhole）,，有焦平面上的熒光信號(hào)能被探測(cè)器接收,。也就是說，每個(gè)時(shí)刻,，只有焦平面上一個(gè)點(diǎn)的信號(hào)被探測(cè),。通過點(diǎn)掃描的方式，一個(gè)個(gè)點(diǎn)的信號(hào)就可以組合出終的圖像,。雙光子顯微鏡（包括多光子顯微鏡）同樣采用點(diǎn)掃描的方式得到圖像,。不同的是，其采用的激發(fā)光波長(zhǎng)較長(zhǎng),，只有當(dāng)兩個(gè)（或更多）激發(fā)光光子幾乎同時(shí)轟擊熒光探針的時(shí)候才可能激發(fā)出熒光信號(hào),。所以只有在光子密度特別大的焦點(diǎn)，出才會(huì)激發(fā)出熒光,。也就是說,，雙光子顯微鏡中，同樣每個(gè)時(shí)刻只有焦平面上一個(gè)點(diǎn)的信號(hào)被探測(cè),，并且連焦平面外的熒光信號(hào)也不會(huì)有,。進(jìn)口investigator雙光子顯微鏡磷光壽命計(jì)數(shù)由于雙光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為激發(fā)光源，適用于長(zhǎng)時(shí)間的研究,。

TOPTICAFemtoFiberultra920超快光纖激光器是一種易于操作且無需維護(hù)的激光系統(tǒng),。其輸出波長(zhǎng)為920nm，非常適合常規(guī)熒光基團(tuán)（如GFP,，eGFP,，Eosin，GCaMP,，CFP,，Calcein或者Venus）的雙光子激發(fā)。能給熒光基團(tuán)提供比較高的峰值功率,，常用于神經(jīng)科學(xué)和其他與激光有關(guān)的生物光子學(xué)學(xué)科。而且其獨(dú)特設(shè)計(jì)（制造簡(jiǎn)單且經(jīng)濟(jì)高效的光源）對(duì)雙光子熒光顯微鏡發(fā)展的革新具有潛在的可能,。在雙光子顯微鏡中,，峰值功率就是亮度！如果您希望獲得比較好的圖像亮度,，那么你就需要短脈沖,，高功率，較重要的是需要干凈的時(shí)間脈沖形狀,。FemtoFiberultra920具有足夠高的輸出功率,，較短的脈沖和獨(dú)特的Clean-Pulse技術(shù)，以及具有相對(duì)比較高的峰值功率，使得其在雙光子顯微鏡中可以實(shí)現(xiàn)****的亮度,，而不會(huì)對(duì)樣品造成不必要的加熱,。FemtoFiberultra920交鑰匙，完全集成的色散補(bǔ)償（可確保樣品處的脈沖較短）,，內(nèi)置的功率控制,，操作直觀以及其堅(jiān)固而緊湊的設(shè)計(jì)，使該系統(tǒng)具有極為友好的用戶體驗(yàn),，是非線性顯微鏡應(yīng)用的較好解決方案,。例如熒光蛋白的雙光子激發(fā)和基于SHG的對(duì)比機(jī)制。

TOPTICAFemtoFiberultra920超快光纖激光器是一種易于操作和免維護(hù)的激光系統(tǒng)其輸出波長(zhǎng)為920nm,，非常適合常規(guī)熒光基團(tuán)(如GFP,、eGFP、曙紅,、GCaMP,、CFP、鈣黃綠素或金星)的雙光子激發(fā),。它可以為熒光基團(tuán)提供相對(duì)較高的峰值功率,，常用于神經(jīng)科學(xué)和其他與激光相關(guān)的光子學(xué)。此外,，其獨(dú)特的設(shè)計(jì)(簡(jiǎn)單和經(jīng)濟(jì)的光源)具有創(chuàng)新雙光子熒光顯微鏡發(fā)展的潛力,。在雙光子顯微鏡中，峰值功率就是亮度,！如果你想獲得更好的圖像亮度,，那么你需要短脈沖，高功率,，更重要的是,，干凈的時(shí)間脈沖形狀。FemtoFiberultra920具有足夠高的輸出功率,、短脈沖,、獨(dú)特的Clean-Pulse技術(shù)和相對(duì)較高的峰值功率，這使得在雙光子顯微鏡中實(shí)現(xiàn)****亮度而無需對(duì)樣品進(jìn)行不必要的加熱成為可能,。FemtoFiberultra920全包式,、完全集成的色散補(bǔ)償(可確保樣品處的短脈沖)、內(nèi)置電源控制,、直觀的操作及其堅(jiān)固緊湊的設(shè)計(jì)使系統(tǒng)具有非常友好的用戶體驗(yàn),，是非線性顯微鏡應(yīng)用的良好解決方案。例如,，熒光蛋白的雙光子激發(fā)和基于SHG的對(duì)比機(jī)制雙光子顯微鏡是結(jié)合了雙光子技術(shù)和掃描共聚顯微鏡的一種新型熒光顯微鏡,。

雙光子顯微鏡是一種先進(jìn)的成像技術(shù),，可以在保持細(xì)胞活性的情況下，對(duì)深層組織進(jìn)行高分辨率成像,。它主要用于生物學(xué),、醫(yī)學(xué)和材料科學(xué)等領(lǐng)域的研究。雙光子顯微鏡的重心技術(shù)是基于雙光子激發(fā)的熒光成像,。當(dāng)激光通過樣品時(shí),，它會(huì)吸收特定波長(zhǎng)的光子，然后發(fā)出熒光,。雙光子顯微鏡使用兩個(gè)連續(xù)的光子同時(shí)激發(fā)樣品,，這樣可以在保持樣品完整性的同時(shí)，獲得高質(zhì)量的圖像,。雙光子顯微鏡具有以下優(yōu)點(diǎn)：1.高分辨率：由于雙光子激發(fā)的特性,，它可以獲得比傳統(tǒng)顯微鏡更高的分辨率。2.深層成像：由于激光的穿透深度限制,，傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡無法對(duì)深層組織進(jìn)行成像,。而雙光子顯微鏡可以解決這個(gè)問題，因?yàn)樗梢约ぐl(fā)樣品的深層熒光,。3.活細(xì)胞成像：雙光子顯微鏡可以在保持細(xì)胞活性的情況下進(jìn)行成像,，這對(duì)于研究細(xì)胞生理學(xué)和生物化學(xué)過程非常有用。4.多模式成像：雙光子顯微鏡可以結(jié)合多種技術(shù),，如光譜成像,、鈣離子成像和神經(jīng)活動(dòng)成像等，以提供更豐富的生物樣品信息,?？傊p光子顯微鏡是一種強(qiáng)大的研究工具,，可以對(duì)深層組織和活細(xì)胞進(jìn)行無損成像,。這使得它在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和材料科學(xué)等領(lǐng)域的研究中具有廣泛的應(yīng)用,。雙光子顯微鏡比單光子共聚焦顯微鏡較大的不同在于無須使用孔限制光學(xué)散射,。進(jìn)口investigator雙光子顯微鏡磷光壽命計(jì)數(shù)

雙光子顯微鏡品牌有哪些？進(jìn)口investigator雙光子顯微鏡熒光壽命計(jì)數(shù)

雙光子顯微成像技術(shù)不是什么新技術(shù),，早在20多年前就有了,，目前已經(jīng)在生命科學(xué)和材料科學(xué)中廣泛應(yīng)用。幾年前雙光子**過期后,，已經(jīng)推出自己的雙光子顯微鏡的廠家估計(jì)不少于10家以上。即便如此,，世界上很多實(shí)驗(yàn)室都搭雙光子,，自己搭的好處有很多，首先是便宜，尤其是實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)有飛秒激光器,，那就更很省錢了,。其次是靈活，可以選擇針對(duì)特殊用途的搭配,，改動(dòng)也靈活,。結(jié)束后的好處就是可以鍛煉隊(duì)伍，一趟走下來可以把新手帶出來,，后期維護(hù)也更加自由,。當(dāng)然壞處也不少，首先是操心,，特別是第1次搭的時(shí)候,，開始要想方案，后來要解決各種實(shí)際問題,。其次是花時(shí)間,，加上買配件的時(shí)間，比買一臺(tái)現(xiàn)成的商業(yè)化雙光子耗時(shí)長(zhǎng)?，F(xiàn)在已經(jīng)有不少關(guān)于如何搭雙光子顯微鏡的文章,，各種protocol，大多是老外寫的,，中文的較少,。其實(shí)完全自己搭一套好用的系統(tǒng)還是不容易的，尤其是沒有經(jīng)驗(yàn)的時(shí)候,，容易走彎路,，多花錢，也多花時(shí)間,，再加上雙光子的重要器件都需要從國(guó)外購(gòu)買,，在國(guó)內(nèi)買這些東西耗時(shí)較長(zhǎng)。因此,，我想總結(jié)一下我們的經(jīng)驗(yàn),，貼出來分享，希望能幫到想自己動(dòng)手的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)口investigator雙光子顯微鏡熒光壽命計(jì)數(shù)