有許多方法可以實(shí)現(xiàn)快速光柵掃描，例如使用振鏡進(jìn)行快速2D掃描,，以及將振鏡與可調(diào)電動透鏡相結(jié)合進(jìn)行快速3D掃描,。而可調(diào)電動式鏡頭由于機(jī)械慣性的限制，無法在軸向快速切換焦點(diǎn),，影響成像速度?，F(xiàn)在它可以被空間光調(diào)制器(SLM)取代。遠(yuǎn)程對焦也是實(shí)現(xiàn)3D成像的一種手段,，如圖2所示,。LSU模塊中，掃描振鏡水平掃描,，ASU模塊包括物鏡L1和反射鏡M,，通過調(diào)整M的位置實(shí)現(xiàn)軸向掃描該技術(shù)不僅可以校正主物鏡L2引入的光學(xué)像差，還可以進(jìn)行快速軸向掃描,。為了獲得更多的神經(jīng)元成像,，可以通過調(diào)整顯微鏡的物鏡設(shè)計(jì)來放大FOV。然而,，大NA和大FOV的物鏡通常很重,，不能快速移動以進(jìn)行快速軸向掃描，因此大FOV系統(tǒng)依賴于遠(yuǎn)程聚焦,、SLM和可調(diào)電動透鏡,。生產(chǎn)和消費(fèi)的角度分析多光子顯微鏡的主要生產(chǎn)地區(qū)、主要消費(fèi)地區(qū)以及主要的生產(chǎn)商,。美國熒光多光子顯微鏡配置

多束掃描技術(shù)可以同時對神經(jīng)元組織的不同位置進(jìn)行成像對兩個遠(yuǎn)距離（相距大于1-2mm）的成像部位,，通常使用兩條單獨(dú)的路徑進(jìn)行成像,；對于相鄰區(qū)域，通常使用單個物鏡的多光束進(jìn)行成像,。多光束掃描技術(shù)必須特別注意激發(fā)光束之間的串?dāng)_問題,，這個問題可以通過事后光源分離方法或時空復(fù)用方法來解決。事后光源分離方法指的是用算法來分離光束消除串?dāng)_,；時空復(fù)用方法指的是同時使用多個激發(fā)光束,，每個光束的脈沖在時間上延遲，這樣就可以暫時分離被不同光束激發(fā)的單個熒光信號,。引入越多路光束就可以對越多的神經(jīng)元進(jìn)行成像,，但是多路光束會導(dǎo)致熒光衰減時間的重疊增加，從而限制了區(qū)分信號源的能力,；并且多路復(fù)用對電子設(shè)備的工作速率有很高的要求,；大量的光束也需要更高的激光功率來維持近似單光束的信噪比，這會容易導(dǎo)致組織損傷,。高速高分辨率多光子顯微鏡峰值功率密度多光子顯微鏡作為一種研究微觀結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù),，在眾多領(lǐng)域得到了普遍的應(yīng)用。

國內(nèi)顯微鏡制造市場目前斷層嚴(yán)重,。目前我國顯微鏡行業(yè)發(fā)展缺乏技術(shù)沉淀,，20年以上經(jīng)營積累的企業(yè)十分稀缺，深度精密制造,、光學(xué)主要部件設(shè)計(jì)及工藝嚴(yán)重制約產(chǎn)業(yè)升級,。目前中國顯微鏡中如多光子顯微鏡、共聚焦掃描和電子顯微鏡等主要集中在徠卡顯微系統(tǒng),、蔡司,、尼康、奧林巴斯等國外企業(yè),。國內(nèi)具備生產(chǎn)顯微鏡能力的企業(yè)屈指可數(shù),，若國內(nèi)顯微鏡企業(yè)能打破技術(shù)壁壘，切入顯微鏡市場,，企業(yè)的生產(chǎn)經(jīng)營將騰躍至一個更高的格局,。未來國產(chǎn)多光子激光掃描顯微鏡替代空間大。目前中國使用的多光子激光掃描顯微鏡幾乎被徠卡顯微系統(tǒng),、蔡司,、尼康和奧林巴斯壟斷。國內(nèi)有能力開始生產(chǎn)多光子激光掃描顯微鏡的企業(yè)極少,，若國內(nèi)能夠制造出高性能,、高可靠性的多光子激光掃描顯微鏡,，無異是會面臨極大的市場機(jī)遇,。

現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展和科技的進(jìn)步,，特別是隨著后基因組時代的到來，人們已經(jīng)能夠根據(jù)需要建立各種細(xì)胞模型,，為在體研究基因表達(dá)規(guī)律,、分子間的相互作用、細(xì)胞的增殖,、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、誘導(dǎo)分化、細(xì)胞凋亡以及新的血管生成等提供了良好的生物學(xué)條件,。然而,，盡管人們利用現(xiàn)有的分子生物學(xué)方法，已經(jīng)對基因表達(dá)和蛋白質(zhì)之間的相互作用進(jìn)行了深入,、細(xì)致的研究,，但仍然不能實(shí)現(xiàn)對蛋白質(zhì)和基因活動的實(shí)時、動態(tài)監(jiān)測,。在細(xì)胞的生理過程中,，基因、尤其是蛋白質(zhì)的表達(dá),、修飾和相萬作用往往發(fā)生可逆的,、動態(tài)的變化。目前的分子生物學(xué)方法還不能捕獲到蛋白質(zhì)和基因的這些變化,，但獲取這些信息對與研究基因的表達(dá)和蛋白質(zhì)之間的相互作用又至關(guān)重要,。因此，發(fā)展能用于,、動態(tài),、實(shí)時、連續(xù)監(jiān)測蛋白質(zhì)和基因活動的方法非常必要,。多光子顯微鏡的發(fā)展歷史充滿了貢獻(xiàn),、開發(fā)、進(jìn)步和數(shù)個世紀(jì)以來多個來源和地點(diǎn)的改進(jìn),。

多光子顯微鏡因擁有較深的成像深度,，和較高的對比度在生物成像中有著重要的意義，但是它通常需要較高的功率,。結(jié)合時間上展開的超短脈沖可以實(shí)現(xiàn)超快的掃描速度和較深的成像深度,，但是其本身所利用的近紅外波段的光會導(dǎo)致分辨率較低。清華大學(xué)陳宏偉教授和北京大學(xué)席鵬研究員合作研究,，結(jié)合了結(jié)構(gòu)光成像和上轉(zhuǎn)化粒子,，開發(fā)了一種基于多光子上轉(zhuǎn)化材料和時間編碼結(jié)構(gòu)光顯微鏡的高速超分辨成像系統(tǒng)(MUTE-SIM)。它可以實(shí)現(xiàn)50MHz的超高的掃描速度,，并突破了衍射極限,，實(shí)現(xiàn)了超分辨成像,。相較于普通的熒光顯微鏡，該顯微鏡提升了,，并且只需要較低的激發(fā)功率,。這種超快、低功率,、多光子的超分辨技術(shù),，在分辨率高的生物深層組織成像上有著長遠(yuǎn)的應(yīng)用前景。多光子顯微鏡中,，極短的激光脈沖聚焦在樣品上的緊密點(diǎn)上,，激發(fā)熒光團(tuán)產(chǎn)生圖像。美國高速高分辨率多光子顯微鏡實(shí)驗(yàn)操作

中國市場多光子顯微鏡進(jìn)出口貿(mào)易趨勢,。美國熒光多光子顯微鏡配置

快速光柵掃描有多種實(shí)現(xiàn)方式,，使用振鏡進(jìn)行快速2D掃描，將振鏡和可調(diào)電動透鏡結(jié)合在一起進(jìn)行快速3D掃描,，但可調(diào)電動透鏡由于機(jī)械慣性的限制在軸向無法快速進(jìn)行焦點(diǎn)切換,，影響成像速度，現(xiàn)可使用空間光調(diào)制器（SLM）代替,。遠(yuǎn)程聚焦也是一種實(shí)現(xiàn)3D成像的手段,。在LSU模塊中，掃描振鏡進(jìn)行橫向掃描,，ASU模塊包括物鏡L1和反射鏡M,，通過調(diào)控M的位置實(shí)現(xiàn)軸向掃描。該技術(shù)不僅可以校正主物鏡L2引入的光學(xué)像差,，還可以進(jìn)行快速的軸向掃描,。想要獲得更多神經(jīng)元成像，可以通過調(diào)整顯微鏡的物鏡設(shè)計(jì)來擴(kuò)大FOV,，但是具有大NA和大FOV的物鏡通常重量較大,，無法快速移動以進(jìn)行快速軸向掃描，因此大型FOV系統(tǒng)依賴于遠(yuǎn)程聚焦,、SLM和可調(diào)電動透鏡,。美國熒光多光子顯微鏡配置