膜片鉗技術(shù)∶從一小片（約幾平方微米）膜獲取電子學(xué)方面信息的技術(shù),，即保持跨膜電壓恒定——電壓鉗位,，從而測量通過膜離子電流大小的技術(shù)。通過研究離子通道的離子流,，從而了解離子運(yùn)輸,、信號傳遞等信息?；驹恚豪秘?fù)反饋電子線路,，將微電極前列所吸附的一個(gè)至幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜的電位固定在一定水平上，對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)觀察,，從而研究其功能,。研究離子通道的一種電生理技術(shù)，是施加負(fù)壓將玻璃微電極的前列（開口直徑約1μm）與細(xì)胞膜緊密接觸,，形成高阻抗封接,，可以精確記錄離子通道微小電流。能制備成細(xì)胞貼附,、內(nèi)面朝外和外面朝內(nèi)三種單通道記錄方式,，以及另一種記錄多通道的全細(xì)胞方式。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)了小片膜的孤立和高阻封接的形成,，由于高阻封接使背景噪聲水平**降低,，相對地增寬了記錄頻帶范圍，提高了分辨率,。另外,，它還具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性和化學(xué)絕緣性。而小片膜的孤立使對單個(gè)離子通道進(jìn)行研究成為可能,。全自動膜片鉗技術(shù)的出現(xiàn)標(biāo)志著膜片鉗技術(shù)已經(jīng)發(fā)展到了一個(gè)嶄新階段,。單電極膜片鉗專題

現(xiàn)在這塊全新的芯片被放置在了跟前置放大器大小類似的小盒子中，便成就了這款全球較小的膜片鉗放大器ePatch,。體積大幅縮減只是一個(gè)表面,，由于細(xì)胞電信號在被電極記錄到后，直接進(jìn)入了芯片,，以較短的路徑直接從模擬信號轉(zhuǎn)變成了數(shù)字信號,，在很大程度上減少了環(huán)境及電路噪音對信號的影響,，所以這款放大器便可以輕易獲取非常高質(zhì)量且穩(wěn)定的電生理信號。ePatch體積只為42*18*78mm,，重量200g,，整套設(shè)備的大小只相當(dāng)于傳統(tǒng)膜片鉗設(shè)備的前置放大器，可以輕松地放入衣服口袋,。用USB接口連接電腦后即可使用,，無需額外電源，連接和使用都極為簡便,。沒有了占地方的放大器,，數(shù)模轉(zhuǎn)換器以及相互連接的眾多電線，電源線等等,，我們的膜片鉗又進(jìn)一步減小了體積,。單電極膜片鉗專題維持細(xì)胞正常形態(tài)和功能完整性。

這一設(shè)計(jì)模式似乎幾十年都沒有改變過,，作為一個(gè)有著近20年膜片鉗經(jīng)驗(yàn)的科研工作者,，記得自己進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室次看到的放大器就差不多是這樣，也不覺得還會有什么變化,。直到筆者在19年訪問歐洲的一個(gè)同樣做電生理的實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候,，發(fā)現(xiàn)了這樣一款獨(dú)特的放大器，讓筆者眼前一亮,，這款放大器從前置放大器出來的線竟然就直接連接在了電腦上，當(dāng)筆者問他們放大器和數(shù)模呢,？他們說,，你看到的就是全部了，所以的部件都包含在了這個(gè)前置放大器中,。

膜片鉗技術(shù)的建立1.拋光及填充好玻璃管微電極,，并將它固定在電極夾持器中。2.通過一個(gè)與電極夾持器連接的導(dǎo)管給微電極內(nèi)一個(gè)壓力,，一直到電極浸入記錄槽溶液中,。3.當(dāng)電極浸沒在溶液中時(shí)給電極一個(gè)測定脈沖（命令電壓，如5-10ms,，10mV）讀出電流,，按照歐姆定律計(jì)算電阻。4.通過膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前列的連接電位（junctionpotentials）調(diào)至零位,，這種電位差是由于電極內(nèi)填充溶液與浸浴液不同離子成分的遷移造成的,。5.用微操縱器將微電極前列在直視下靠近要記錄的細(xì)胞表面，并觀察電流的變化,，直至阻抗達(dá)到1GΩ以上形成"干兆封接"6.調(diào)整靜息膜電位到期望的鉗位電壓的水平,，使放大器從"搜尋"轉(zhuǎn)到"電壓鉗"時(shí)細(xì)胞不至于鉗位到零,。而由通道蛋白介導(dǎo)的膜電導(dǎo)構(gòu)成了膜反應(yīng)的主動成分，它的電流電壓關(guān)系是非線性的,。

膜片鉗技術(shù)與其它技術(shù)相結(jié)合Neher等**將膜片鉗技術(shù)與Fura2熒光測鈣技術(shù)結(jié)合,，同時(shí)進(jìn)行如細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度、細(xì)胞膜離子通道電流及細(xì)胞膜電容等多指標(biāo)變化的快速交替測定,，這樣便可得出同一事件過程中,，多種因素各自的變化情況，進(jìn)而可分析這些變化間的相互關(guān)系,。Neher將可光解出鈣離子的鈣螯合物引入膜片鉗技術(shù),，進(jìn)而可以定量研究鈣離子濃度與分泌率的關(guān)系及比較大分泌率等指標(biāo)。他又創(chuàng)膜片鉗的膜電容檢測與碳纖電極電化學(xué)檢測聯(lián)合運(yùn)用的技術(shù),。之后又將光電聯(lián)合檢測技術(shù)與碳纖電極電化學(xué)檢測技術(shù)首先結(jié)合起來,。這種結(jié)合既能研究分泌機(jī)制，又能鑒別分泌物質(zhì),，還能互相彌補(bǔ)各單種方法的不足,。Eberwine等于1991年首先將膜片鉗技術(shù)與RT-PCR技術(shù)結(jié)合起來運(yùn)用，可對形態(tài)相似而電活動不同的結(jié)果作出分子水平的解釋,，從此開始了膜片鉗與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的時(shí)代∶基因重組技術(shù),，膜通道蛋白重建技術(shù)。Neher將膜片鉗技術(shù)與Fura 2 熒光測鈣技術(shù)結(jié)合,。單電極膜片鉗專題

膜片鉗技術(shù)原理膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極接觸細(xì)胞,，形成吉?dú)W姆（GΩ）阻抗。單電極膜片鉗專題

內(nèi)面向外膜片(inside-outpatch)高阻封接形成后,，在將微管電極輕輕提起,，使其與細(xì)胞分離，電極端形成密封小泡,，在空氣中短暫暴露幾秒鐘后,，小泡破裂再回到溶液中就得到“內(nèi)面向外”膜片。此時(shí)膜片兩側(cè)的膜電位由固定電位和電壓脈沖控制,。浴槽電位是地電位,，膜電位等于玻管電位的負(fù)值。如放大器的電流監(jiān)視器輸出是非反向的,，則輸出將與膜電流(Im)的負(fù)值相等,。外面向外膜片(out-sidepatch)高阻封接形成后，繼續(xù)以負(fù)壓抽吸,，膜片破裂再將玻管慢慢地從細(xì)胞表面垂直地提起,，斷端游離部分自行融合成脂質(zhì)雙層，此時(shí)高阻封接仍然存在,。而膜外側(cè)面接觸浴槽液,。這種膜片形式應(yīng)測膜片電阻,，并消除漏電流和電容電流。整個(gè)過程要當(dāng)心是否形成囊泡,。如果浴槽保持地電位水平,，膜電位即與玻管電位相等。如放大器是非反向的,，放大器的輸出將與Im值相等,。單電極膜片鉗專題