早期空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)的另一條發(fā)展路線是基因捕獲和增強(qiáng)子捕獲篩選,開發(fā)于二十世紀(jì)八十年代,,當(dāng)時 DNA 測序通量正在增加,,動物基因組是新開放的前沿領(lǐng)域。果蠅和小鼠的篩選是在八十年代后期進(jìn)行的,,目的是觀察未靶向且通常未知的基因表達(dá)情況,。隨著通量的增加,增強(qiáng)子和基因捕獲技術(shù)在九十年代成為空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)的技術(shù),,直到 WMISH 在九十年代后期興起,。WMISH 技術(shù)的自動化程度較高,避免了對轉(zhuǎn)基因品系的依賴,,同時由于在二十一世紀(jì)初獲得物種的參考基因組信息變得越來越便利,,探針設(shè)計(jì)因此也更為方便??臻g轉(zhuǎn)錄組可以進(jìn)行細(xì)胞間通訊分析,,區(qū)別在于空間位置信息可以同時用于識別潛在的細(xì)胞間相互作用。四川運(yùn)用空間轉(zhuǎn)錄組
10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)的準(zhǔn)確性高嗎,?下圖是一個將10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)應(yīng)用于小鼠海馬體研究的案例,。A圖為腦組織切片的HE染色結(jié)果,從10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果中,,可以清晰看到Tmsb4x(B圖)和Selenow(C圖)在海馬體區(qū)域高表達(dá),,和已知的研究結(jié)果一致性較高。開展10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組需要做哪些準(zhǔn)備,?空間轉(zhuǎn)錄組是一項(xiàng)十分前沿的技術(shù),,涉及到很多細(xì)節(jié)方面的準(zhǔn)備工作,例如組織類型的選擇,、前期預(yù)實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì),、病理區(qū)域的確認(rèn)等一系列內(nèi)容。而且實(shí)驗(yàn)中存在很多不確定性因素,,處理不慎容易導(dǎo)致整個項(xiàng)目失敗,。四川運(yùn)用空間轉(zhuǎn)錄組空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)主要包括 MERFISH 和 seqFISH。
10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)現(xiàn)原理是什么,?10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫構(gòu)建的每張載玻片上有四個捕獲區(qū)域,,每個捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm,包含5000個被條形碼標(biāo)記的點(diǎn)(barcoded spots),,每個點(diǎn)的直徑為55 μm,,點(diǎn)和點(diǎn)之間中心的距離為100 μm,并且每個點(diǎn)都有一個barcode序列,。組織切片的細(xì)胞中會釋放出mRNA,,遷移到每個spot的mRNA會被標(biāo)記上相應(yīng)的barcode序列,,然后進(jìn)行文庫構(gòu)建并進(jìn)行測序。根據(jù)數(shù)據(jù)的條形碼信息對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,,以確定哪些數(shù)據(jù)來自哪個位置,,從而實(shí)現(xiàn)空間基因表達(dá)的可視化。
基于原位測序的空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù),?;谠粶y序(ISS)的方法通過測序產(chǎn)生空間轉(zhuǎn)錄組信息,這種方法只依靠連接酶連接兩段DNA—一段已知序列的引物和一個探針與模板匹配,,不匹配的探針就會被洗掉,。2013年開發(fā)的ISS中,每個探針使用一個查詢堿基來測序基因條形碼,。FISSEQ和后來的EXeq使用了SOLiD,,每個探針使用兩個查詢堿基來測序環(huán)化和RCA擴(kuò)增的cDNAs。在STARmap中,,基因條形碼由SEDAL測序,,其中還使用了兩個類似固體的查詢堿基來避免錯誤。BARseq還用基因條形碼放大了RCA探針,?;贗SS技術(shù)的優(yōu)勢包括:單細(xì)胞分辨率、亞細(xì)胞轉(zhuǎn)錄物定位和可應(yīng)用于更大的組織區(qū)域,。缺點(diǎn)是:檢測效率較低,。scRNA-seq 技術(shù)的進(jìn)步啟發(fā)了利用高分辨率轉(zhuǎn)錄組定量分析與空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)的互補(bǔ)性質(zhì)的新方法。
轉(zhuǎn)錄本的空間位置信息可以通過在原位陣列上捕獲的組織切片中的轉(zhuǎn)錄本來獲取,,目前已有多種技術(shù)策略被開發(fā)報(bào)道,, 如空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)(Spatial Transcriptomics,ST)和 Visium 技術(shù),,通過將包含空間位置信息的條形碼,、UMI 標(biāo)簽、poly-dT 的探針固定在商用微陣列載玻片上,,來捕獲包含 poly(A) 尾巴的轉(zhuǎn)錄本,,并獲取全轉(zhuǎn)錄組水平的基因表達(dá)及位置信息。一些無需成像即可計(jì)算重建空間基因表達(dá)模式所需信息的技術(shù)也被開發(fā)了出來,,其中之一就是是 DNA 顯微技術(shù),,它記錄 cDNA 之間的接近度,,該信息可用于重建轉(zhuǎn)錄本之間的相對位置,。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目執(zhí)行經(jīng)驗(yàn),致力通過質(zhì)量的服務(wù),,助力各位科研工作者取得新的突破,。浙江生物技術(shù)空間轉(zhuǎn)錄組
空間轉(zhuǎn)錄組使得我們在檢測基因表達(dá)的同時獲得基因在組織內(nèi)部的空間位置信息。四川運(yùn)用空間轉(zhuǎn)錄組
空間轉(zhuǎn)錄組的方法和技術(shù)有哪些?廣義上講,,現(xiàn)有的生成空間分辨轉(zhuǎn)錄組學(xué)的方法可分為四類:用于空間重建的計(jì)算策略和組學(xué)實(shí)驗(yàn)的組合,,使用激光捕獲顯微切割(LCM)結(jié)合高通量進(jìn)行直接測量,使用熒光物質(zhì)的基于圖像的原位轉(zhuǎn)錄組學(xué) ,,以及基于寡核苷酸的空間條形碼再加上高通量,。每種方法都有其優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)??臻g重構(gòu)的計(jì)算策略:這種計(jì)算方法可以充分利用內(nèi)在基因表達(dá)模式或共表達(dá)的趨勢,,從單個細(xì)胞的大量轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中重構(gòu)細(xì)胞間的環(huán)境。然而,,這些推論方法在某些情況下*呈現(xiàn)空間趨勢或特定組織的總體布局,。基于LCM的方法:基于LCM的轉(zhuǎn)錄組學(xué)或基因組學(xué)成功地獲得了單個細(xì)胞的空間轉(zhuǎn)錄組,,盡管其通量很低,,但是在可以標(biāo)記成千上萬個單個細(xì)胞位置的多路復(fù)用條形碼策略可行之前,將少量細(xì)胞的數(shù)據(jù)粗略地整合到構(gòu)成***的巨大背景中,,可能具有一定價(jià)值,。基于圖像的原位轉(zhuǎn)錄組學(xué):基于圖像的原位轉(zhuǎn)錄組學(xué)在很大程度上增加了可檢測區(qū)域,,但也存在一些問題,,例如幾種smFISH方法很難從包括信號干擾、轉(zhuǎn)錄本積累等復(fù)雜背景中提取單個細(xì)胞,??臻g條形碼加高通量:費(fèi)用較高且無法在單個細(xì)胞中獲得轉(zhuǎn)錄組。四川運(yùn)用空間轉(zhuǎn)錄組
上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司位于聯(lián)航路1188號25幢,,是一家專業(yè)的檢驗(yàn)檢測服務(wù),。(依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動,,具體經(jīng)營項(xiàng)目以相關(guān)部門批準(zhǔn)文件或許可證件為準(zhǔn))一般項(xiàng)目:生物醫(yī)藥產(chǎn)品,、生化產(chǎn)品的研發(fā),醫(yī)藥中間體,、化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)品化學(xué)品,、監(jiān)控化學(xué)品、易制毒化學(xué)品)的研發(fā),、銷售,,儀器儀表的銷售,并提供相關(guān)技術(shù)咨詢,、技術(shù)服務(wù),,會務(wù)服務(wù),,企業(yè)管理咨詢。公司,。歐易生物是上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司的主營品牌,,是專業(yè)的檢驗(yàn)檢測服務(wù)。(依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動,,具體經(jīng)營項(xiàng)目以相關(guān)部門批準(zhǔn)文件或許可證件為準(zhǔn))一般項(xiàng)目:生物醫(yī)藥產(chǎn)品、生化產(chǎn)品的研發(fā),,醫(yī)藥中間體,、化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)品化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品,、易制毒化學(xué)品)的研發(fā),、銷售,儀器儀表的銷售,,并提供相關(guān)技術(shù)咨詢,、技術(shù)服務(wù),會務(wù)服務(wù),,企業(yè)管理咨詢,。公司,擁有自己**的技術(shù)體系,。公司不僅*提供專業(yè)的檢驗(yàn)檢測服務(wù),。(依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動,,具體經(jīng)營項(xiàng)目以相關(guān)部門批準(zhǔn)文件或許可證件為準(zhǔn))一般項(xiàng)目:生物醫(yī)藥產(chǎn)品,、生化產(chǎn)品的研發(fā),醫(yī)藥中間體,、化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)品化學(xué)品,、監(jiān)控化學(xué)品、易制毒化學(xué)品)的研發(fā),、銷售,,儀器儀表的銷售,并提供相關(guān)技術(shù)咨詢,、技術(shù)服務(wù),,會務(wù)服務(wù),企業(yè)管理咨詢,。,,同時還建立了完善的售后服務(wù)體系,為客戶提供良好的產(chǎn)品和服務(wù),。自公司成立以來,,一直秉承“以質(zhì)量求生存,以信譽(yù)求發(fā)展”的經(jīng)營理念,,始終堅(jiān)持以客戶的需求和滿意為重點(diǎn),,為客戶提供良好的科研服務(wù),科研檢測,,學(xué)術(shù)研究,,技術(shù)咨詢,從而使公司不斷發(fā)展壯大,。