胰酶分裝凍存時要注意什么,？胰酶分裝時盡量分裝成多瓶,，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則,。因為冷凍保存時體積會膨脹,，多次使用同一瓶胰酶反復凍融會降低消化效果并增大污染的可能性,。5,、怎么才能判斷胰酶消化完全,？注意：不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了,。一般肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了,，多半呈沙狀移動就可以了，就應該停止消化,。6,、胰酶適用于哪些細胞消化,？它的消化效果與哪些有關呢,？胰酶適用于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細胞,，如胚胎、上皮,、肝,、腎等組織,，但對纖維性組織和較硬的*組織效果較差,。胰酶的消化效果主要與pH值,、溫度,、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關,。胰蛋白酶溶液作為細胞分離試劑廣泛應用于貼壁細胞的連續(xù)培養(yǎng)。湖南國產(chǎn)胰酶哪個好

細胞傳代消化時所用胰酶濃度?常見濃度為0.25%的胰酶(含有螯合劑),，半貼壁細胞或者對胰酶敏感的細胞,，可采用0.05%濃度的胰酶(含有或者不含有螯合劑)進行細胞消化。由于細胞膜上的粘附蛋白需要金屬離子維持其活性,，常見的胰酶中含有EDTA等整合劑,如果細胞貼壁不是非常緊密,，也可用不含有螯合劑的胰酶進行細胞消化。胰酶對細胞膜上粘附蛋白的損害比較大,，如果進行細胞膜上蛋白的研究,，建議選擇溫和的細胞消化試劑,，盡量減少對細胞膜上蛋白的損傷。此外，由于胰酶自身也是一種蛋白,，胰酶也會自己剪切自己,建議胰酶不要反復凍融,，拿到手中的大瓶胰酶進行分裝使用。除了常見的胰酶(含有或者不含有EDTA),。湖南國產(chǎn)胰酶哪個好胰蛋白酶可以用于原代細胞的傳代過程中分散組織。

對一般細胞0.25%胰酶(胰蛋白酶,，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中,，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾,，分裝,，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要,，機械攪拌對酶是一種沖擊,，如果起沫,，酶就變性了,。低溫,，防止酶失活對難消化的細胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因為EDTA可以絡合Ca2,，增加消化效力

乙二胺四乙酸：（EDTA）是一種有機化合物，常溫常壓下為白色粉末,。它是一種能與Mg2+,、Ca2+、Mn2+,、Fe2+等二價金屬離子結合的螯合劑,。動物細胞在粘附的時候，需要有Ca或Mg離子的參與,，EDTA與他們結合后,，導致動物細胞粘附能力降低,，再加上胰蛋白酶的消化作用，使得細胞與瓶壁快速脫離,。兩者起到了協(xié)同消化的作用,。難消化的細胞，胰酶中可填加EDTA,。EDTA對細胞貼壁性有影響,，因此使用時要甚重。如果影響貼壁,，但消化時必須要用,，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清,，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),，可去除EDTA。如果對貼壁沒影響,，那么可不離心,。胰酶細胞消化液(不含EDTA)消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。

    使**或細胞片分散成單個細胞,，制成細胞懸液用于進一步的實驗,。影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件,、凍存或4℃保存時間長短,、是否反復凍融、化凍后存放時間及溫度等）,、消化時的溫度（氣溫,、細胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等。加入胰蛋白酶-EDTA溶液,，視細胞瓶的大小加入體積為2ml或更多（依培養(yǎng)器皿的大小而定）,，以使充分浸潤；一般消化時間約為1至3分鐘,，肉眼觀察瓶底由半透明（細胞單層連接成片）轉為透明,、點狀（出現(xiàn)細小空隙）時，棄去細胞消化液,，或看見培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可,。并加入適量的完全培養(yǎng)液終止消化，吹打分散,；如見大量細胞片狀脫落,，已消化過頭，則不能頃倒消化液而直接進行下一步操作,。（消化過頭,，可造成大量細胞從瓶壁上脫下,，甚至造成細胞破碎。由于血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑,，所以加入完全培養(yǎng)基可以終止反應,。胰酶配置方法：1、培養(yǎng)液配制,，方便好用，對細胞影響小,，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2,、生理鹽水配制，要先調(diào)ph值（①胰酶（1：250）克②EDTA-Na③NaCl④KCl⑤Glucose⑥PhenolRed⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時,，調(diào)pH,，過濾**。）3,、pbs（：稱取胰酶粉末,。胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運輸,。海南胰酶

胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的,。湖南國產(chǎn)胰酶哪個好

0.25%胰酶是細胞生物學中常用的一種生物試劑，下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題,。胰酶的使用濃度是多少,？胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。為什么收到的胰酶會有顏色差異,？商品化胰酶溶液需要用干冰運輸,，在運輸過程中，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換,，導致溶液PH的漂移,。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的,。由干冰運輸過程中導致的PH值的變化很小,，PH值會從7.2-8.0變化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的時候,，溶液呈淡紅色,；PH值6.8左右時呈淡黃色。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,，歸因于使用干冰運輸,。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象，在不同供應商的胰酶產(chǎn)品都會出現(xiàn),。湖南國產(chǎn)胰酶哪個好