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    3充分裂解后。12000rpm離心5min,，取上清。4取部分上清蛋白用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度,，按如下步驟①按試劑盒說明書將A液和B液以501的比例配制成工作液；②取2000μg/mL的BSA標準品,，用PBSpH2000μg/mL、1500μg/mL,、1000μg/mL,、750μg/mL、500μg/mL,、250μg/mL,、125μg/mL,、25μg/mL,、0μg/mL共9時間就是金錢,，效率就是生命唯有惜時才能成功,，唯有努力方可成就個濃度梯度；③取上清液10μL,，用PBS稀釋20倍；④每管中加20μL蛋白標準品或稀釋后的上清液,，再加上述工作液，37℃孵育30min,，562nm處測吸光度,，記錄OD值；⑤根據(jù)蛋白標準品的濃度及相應(yīng)OD值繪制標準曲線標標準準曲曲線線yy00..00000077xx00..11553322RR2200..0..4400..8811..2211..000000濃濃度度uugg//mmLLOODD值值各各濃濃度度標標準準品品線線性性各各濃濃度度標標準準品品根據(jù)標準方程計算樣品總蛋白濃度（mg/mL）樣品.OD值mg/,、Western-Blot檢測總蛋白中目的蛋白表達,。1灌膠①蒸餾水清洗灌膠玻璃板，豎直晾干,。②配制13％分離膠10mL，加TEMED10μL,、10％過硫酸銨100μL,，混勻后立即灌膠，灌至齒梳下緣2～3mm（事先做好標記）,，用異丙醇封閉液面以去除氣泡并隔絕空氣,，室溫靜置45min待膠完全聚合,。瑞普信提供專業(yè)QPCR第三方基礎(chǔ)實驗檢測。

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WB（Westernblot），即蛋白印跡或免疫印跡（immunoblotting）,，是一項在分子生物學,、生物化學,、免疫學等領(lǐng)域中應(yīng)用非常廣的技術(shù)。這一技術(shù)利用抗體與組織或細胞樣品中特定蛋白的特異性結(jié)合作用,，根據(jù)顯色條帶的位置和強弱實現(xiàn)蛋白鑒定和表達分析,。WB技術(shù)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,。選用合適的內(nèi)參抗體能夠校正蛋白定量和上樣過程中的誤差,，通過灰度計量可以定性或定量分析不同樣品中蛋白表達情況。做第三方檢測時為什么有時候條帶會出現(xiàn)拖帶或者彎曲,？在使用特定裂解緩沖液時,，或者一些植物或脂肪含量高的樣品中成分較復雜,，會對電泳條帶產(chǎn)生干擾,；樣品變性不徹底,、有降解發(fā)生,、修飾、上樣過大等情況會導致拖帶,，凝膠不均勻,、電泳裝置滲漏,、電壓/電流過大、膠孔不平等原因會導致條帶彎曲,，當很小分子量的蛋白電泳到接近凝膠下沿時也會出現(xiàn)條帶扭曲。甘肅masson染色第三方檢測公司

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