TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有比較大消光系數(shù),,如果HRP量少,,H:O:和TMB過量時,則形成藍(lán)色的陽離子根,。降低pH,,即可使藍(lán)色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min,。因此,,450nm和492 nm兩個波長是目前ELISA測定常用的。各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動轉(zhuǎn)換的部件,,可以同時安裝6~8片濾光片,所配備的濾光片均應(yīng)包括上述兩個波長,,有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,,影響不大。除了這兩個基本濾光片外,,考慮到雙波長比色的需要,,還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片,其他濾光片可根據(jù)自己的需要選擇,。有時,,有的實驗室希望用酶標(biāo)儀作微量生化測定,故酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家對其生產(chǎn)的酶標(biāo)儀擴(kuò)展了紫外檢測功能,,此時需要一個340 nm波長濾光片,。此時,酶標(biāo)儀的測定波長范圍就成為340—750nm或800nm,。北京雙檢測模式酶標(biāo)儀高清觸屏K3 Plus酶標(biāo)儀擴(kuò)展內(nèi)存可以儲存多達(dá)500個測定方法,。
酶標(biāo)儀測定的原理是在特定波長下,,檢測被測物的吸光值大小,。隨著檢測方式的不斷發(fā)展,擁有多種檢測模式的單體臺式酶標(biāo)儀叫做多功能酶標(biāo)儀,,可檢測吸光度(Abs),、熒光強(qiáng)度(FI)、時間分辨熒光(TRF),、熒光偏振(FP),、和化學(xué)發(fā)光(Lum)。酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀,。光柵型酶標(biāo)儀可以截取光源波長范圍內(nèi)的任意波長,,而濾光片型酶標(biāo)儀則根據(jù)選配的濾光片,只能截取特定波長進(jìn)行檢測,??蓮V泛應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析(A260/A280)和蛋白定量(A280/BCA/Braford/Lowry),,酶活,、酶動力學(xué)檢測,酶聯(lián)免疫測定(ELISAs),細(xì)胞增殖與毒性分析,,細(xì)胞凋亡檢測(MTT),,報告基因檢測及G蛋白偶聯(lián)受體分析(GPCR)等。K3 Plus酶標(biāo)儀顯示屏內(nèi)置軟件界面,,分別4大菜單界面,。
光柵式酶標(biāo)儀使用方便靈活,,可以通過軟件選擇任意波長的光,。山東全自動酶標(biāo)儀Elisa實驗
合適的軟件功能對于ELISA定量測定同樣很重要。有研究表明,,四參數(shù)方程能較好地反映免疫測定的劑量反應(yīng)曲線,,*為適合于定量酶免疫測定的曲線擬合。因此,,如目的是定量測定,,則在酶標(biāo)儀的軟件功能中,要有這種曲線回歸方程計算分析功能。其他諸如連點,、直線等回歸計算,,則可根據(jù)酶標(biāo)儀的應(yīng)用目的而定,如兼用于微量生化測定,,則此類回歸計算就很有必要,。此外,酶標(biāo)儀兼做酶標(biāo)動力學(xué),、凝集反應(yīng)測定所需的軟件是否應(yīng)具備,,當(dāng)然也應(yīng)根據(jù)使用目的而定。由于此類軟件一般都較為昂貴,,酶標(biāo)儀常另外單獨按需配備,,如果不是實驗室特殊需要,就不必強(qiáng)求這種軟件功能,。山東全自動酶標(biāo)儀Elisa實驗
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