分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源,,通過系列分光裝置,,從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源,,光線透過測(cè)試的樣品后,,部分光線被吸收,,計(jì)算樣品的吸光值,,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度,。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí),,被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長(zhǎng)度)成正比,,其關(guān)系如下式:
A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度;
I0為入射的單色光強(qiáng)度,;
I 為透射的單色光強(qiáng)度,;
T 為物質(zhì)的透射率;
k 為摩爾吸收系數(shù),;
L 為被分析物質(zhì)的光程,,即比色皿的邊長(zhǎng);
c 為物質(zhì)的濃度,;
物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng),,以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液,,測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū),,除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外,,很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,,且常使用單色光純度較差的儀器,,故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。
熒光分光光度計(jì)有兩個(gè)單色器,,而一般紫外可見分光光度計(jì)只有一個(gè)單色器,。湖北超微量超微量分光光度計(jì)核酸檢測(cè)
超微量分光光度計(jì)在核酸定量和分析中的應(yīng)用:
分光光度測(cè)定法是一項(xiàng)定量和分析生物成分的成熟技術(shù)。其中,,核酸是生物實(shí)驗(yàn)室**常檢測(cè)的生物成分之一,。確定這些樣品的濃度和純度對(duì)許多下游實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。
核酸主要吸收260nm下的紫外光,,其濃度可以應(yīng)用朗伯比爾定律通過它們的相關(guān)消光系數(shù)和樣品光程計(jì)算出來,。
首先,260nm的紫外光直接照射樣品,,并且穿過樣品,,而另一邊的光電檢測(cè)器則測(cè)定有多少光被吸收。通過對(duì)照參比(一般是樣品稀釋液),,可以定量樣品中的核酸濃度,。
海南超微量超微量分光光度計(jì)菌液檢測(cè)Micro Drop可以檢測(cè)45-48mm的10mm光程的比色皿。
A260:是核酸比較高吸收峰的吸收波長(zhǎng),,比較好測(cè)量值的范圍為0.1至1.0,。如果不在此范圍,,稀釋或濃縮樣品,使之在此范圍內(nèi),;如果吸光度小于0.05,,檢查是否存 在操作因素(如移液不準(zhǔn)確,樣品內(nèi)有懸浮物等)影響,。DNA樣品的A260 吸光度值是否>0.1,。(請(qǐng)注意,這個(gè)值跟儀器無關(guān),,核酸的吸光度必需大于0.1,,其值才有效和可靠,因?yàn)闃悠分械碾s質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常 會(huì)對(duì)光有一定吸收,,其值<0.1),;
A280:是蛋白比較高吸收峰的吸收波長(zhǎng).
A230:是碳水化合物比較高吸收峰的吸收波長(zhǎng):
A260/A280:是核酸純度的指示值。純度好的DNA或RNA,,在pH7-8.5 下A260 / A280的比值應(yīng)該在2.0 或2.5,。 純凈的樣品比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響,。
A260/A230:純DNA和 RNA的A260/A230比值為2.5。若比值小于2.0標(biāo)明樣品被碳水化合物(糖類),、鹽類或有機(jī)溶劑污染,,需要純化樣品。
Micro Drop超微量分光光度計(jì)產(chǎn)品應(yīng)用:
1.紫外檢測(cè):常規(guī)紫外光波長(zhǎng)下檢測(cè)樣品吸光值,;
2.核酸檢測(cè):可檢測(cè)dsDNA,、ssDNA、RNA等不同類型核酸的濃度及其在260nm,、280nm處的吸光值,;
3.探針檢測(cè):檢測(cè)熒光標(biāo)記探針的吸光值,可用于去除未能標(biāo)記探針的樣品,;
4.蛋白檢測(cè):檢測(cè)普通純化后蛋白的濃度和280nm處的吸光值,,BCA、 Bradford,、Lowry,、Pierce 660nm 蛋白定量分析;
5.菌液/懸浮細(xì)胞濃度檢測(cè):可檢測(cè)菌液OD600值及監(jiān)測(cè)懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)情況,;
6.動(dòng)力學(xué)檢測(cè):用于酶活力和生長(zhǎng)曲線等動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)的測(cè)定,;
7.全波長(zhǎng)掃描:185-910nm全波長(zhǎng)掃描,顯示吸收曲線。
使用光譜進(jìn)行定性分析的儀器叫做光譜儀,。
超微量分光光度計(jì)新晉小生——寶予德MicroDrop簡(jiǎn)介:
一機(jī)多用:既可使用超微量基座,,也可使用常規(guī)比色皿,想怎么測(cè)就怎么測(cè),!
開機(jī)即用:交貨后即可使用 – 安裝時(shí)不需要進(jìn)行任何調(diào)節(jié),。
上樣量少:上樣范圍0.5μl-2μl,節(jié)約珍貴的樣本,。
無線連接:無需數(shù)據(jù)線連接電腦,,從此告別雜亂的數(shù)據(jù)連接線,儀器可自發(fā)WiFi信號(hào),。
全光譜范圍:可檢測(cè)185-910nm波長(zhǎng)下樣本的吸光值,,檢測(cè)范圍廣,基座模式下因?yàn)榭s短了光程,,檢測(cè)濃度范圍非常廣闊,,dsDNA:2-15000ng/ul,無需稀釋樣品,,簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程,,減少實(shí)驗(yàn)誤差,能夠滿足極大部分用戶的需求,。
檢測(cè)快速:全波長(zhǎng)掃描時(shí)間只需5s,,每個(gè)樣品所需要的時(shí)間不到5秒鐘,快速的檢測(cè)速度為大量的樣品檢測(cè)節(jié)省了寶貴時(shí)間,。
美觀簡(jiǎn)約:自重2.1kg,便于移動(dòng),,占地面積小,,節(jié)省實(shí)驗(yàn)臺(tái)面空間。
數(shù)據(jù)存儲(chǔ):可自定義選擇數(shù)據(jù)存儲(chǔ),,不僅能夠自動(dòng)保存檢測(cè)原始數(shù)據(jù),,也可導(dǎo)出Excel數(shù)據(jù)表,方便計(jì)算后續(xù)實(shí)驗(yàn)的加樣量,。
Micro Drop在基座模式下可以較高檢測(cè)400mg/ml的BSA而不用稀釋,。貴州高重復(fù)性超微量分光光度計(jì)菌液檢測(cè)
熒光分光光度計(jì)是以氙燈做為光源,而紫外可見分光光度計(jì)是以氘燈作為紫外區(qū)光源,。湖北超微量超微量分光光度計(jì)核酸檢測(cè)
超微量分光光度計(jì)的應(yīng)用:
(一)核酸的定量:
核酸的定量是超微量分光光度計(jì)使用頻率比較高的功能,。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,,單鏈DNA,、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的比較高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260nm,。每種核酸的分子構(gòu)成不一,,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,,事先要選擇對(duì)應(yīng)消光因子,。如:1OD的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,,40μg/ml的RNA,,30μg/ml的Olig。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,,從而得出相應(yīng)的樣品濃度,。除了核酸濃度,分光光度計(jì)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度,,如A260/A280的比值,,用于評(píng)估樣品的純度,因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm,。純凈的樣品,,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響,。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,,多肽,,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0,。
湖北超微量超微量分光光度計(jì)核酸檢測(cè)
上海寶予德科學(xué)儀器有限公司是國(guó)內(nèi)一家多年來專注從事移液器,,吸頭,酶標(biāo)儀,,分光光度計(jì)的老牌企業(yè),。公司位于上海市松江區(qū)新橋鎮(zhèn)莘磚公路258號(hào)40幢201室-1,成立于2013-12-19,。公司的產(chǎn)品營(yíng)銷網(wǎng)絡(luò)遍布國(guó)內(nèi)各大市場(chǎng),。公司主要經(jīng)營(yíng)移液器,吸頭,,酶標(biāo)儀,,分光光度計(jì)等產(chǎn)品,我們依托高素質(zhì)的技術(shù)人員和銷售隊(duì)伍,,本著誠(chéng)信經(jīng)營(yíng),、理解客戶需求為經(jīng)營(yíng)原則,,公司通過良好的信譽(yù)和周到的售前、售后服務(wù),,贏得用戶的信賴和支持,。公司與行業(yè)上下游之間建立了長(zhǎng)久親密的合作關(guān)系,確保移液器,,吸頭,,酶標(biāo)儀,分光光度計(jì)在技術(shù)上與行業(yè)內(nèi)保持同步,。產(chǎn)品質(zhì)量按照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研發(fā)生產(chǎn),,絕不因價(jià)格而放棄質(zhì)量和聲譽(yù)。上海寶予德科學(xué)儀器有限公司以誠(chéng)信為原則,,以安全,、便利為基礎(chǔ),以優(yōu)惠價(jià)格為移液器,,吸頭,,酶標(biāo)儀,分光光度計(jì)的客戶提供貼心服務(wù),,努力贏得客戶的認(rèn)可和支持,,歡迎新老客戶來我們公司參觀。