Endo H糖苷內(nèi)切酶H：結(jié)構(gòu),、功能及其在糖生物學中的應(yīng)用摘要Endo H糖苷內(nèi)切酶H（Endo H）是一種專門作用于糖鏈的內(nèi)切酶，對研究蛋白質(zhì)糖基化修飾具有重要意義,。本文將探討Endo H的結(jié)構(gòu)特性,、催化機制以及在糖生物學研究中的應(yīng)用。引言蛋白質(zhì)糖基化是一種普遍存在的翻譯后修飾,，對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),、穩(wěn)定性和功能發(fā)揮著關(guān)鍵作用。Endo H是一種能夠特異性識別并切割高甘露糖型N-連接糖鏈的內(nèi)切酶,，廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)糖基化分析,。Endo H的結(jié)構(gòu)特性Endo H由菌Helix pomatia分泌，其分子量約為130 kDa,。該酶具有一個催化中心,，能夠識別并切割特定的糖苷鍵。Endo H的三維結(jié)構(gòu)尚未完全解析,，但其氨基酸序列和某些關(guān)鍵催化殘基已被確定,。催化機制Endo H通過水解N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）與N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）之間的β-1,4糖苷鍵，從而釋放高甘露糖型N-連接糖鏈,。該過程不涉及輔因子，表明Endo H催化機制可能依賴于其活性位點的氨基酸殘基。PNGase F是一種酰胺水解酶,，能夠特異性地裂解糖蛋白中由天冬酰胺連接的高甘露糖,、雜合和復(fù)雜型的寡糖。Recombinant Human BDCA-2 Protein,mFc Tag

糖苷酶F(PNGaseF)酶活定義（UnitDefinition）1個酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中,，37℃條件下1小時從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量,。儲存條件-25~-15℃保存，有效期1年,。使用方法1,、變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化：1）在水中加入1μLBuffer1和目標糖蛋白（1-20μg），至終體積10μL,；2）100℃溫度下煮沸10min使其變性,，冰上冷卻，離心10秒,；加入2μL的Buffer2,、2μL的10％NP-40、6μL去離子水,，總反應(yīng)體積20μL,；加入1-2μL的PNGase，輕輕混勻,。在37℃孵育1-3h,。2、非變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化：1）在水中加入2μL的Buffer2和目標糖蛋白（1-20μg）至體積為20μL,。2）加入2~5μL的PNGaseF,輕輕混勻,。3）37°C孵育4-24h。注意：在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化,，在非變性條件下可能需要增加PNGaseF的量和延長孵育時間,。注意事項1.PNGaseF建議搭配我司提供的配套緩沖液使用，按我司說明書建議的操作量配套緩沖液足夠,。如您由于使用體系造成配套緩沖液不足,，可咨詢當?shù)劁N售進行購買Recombinant Cynomolgus CDH17/Cadherin 17 Protein,His Tagα-凝血酶，是血液凝固途徑中的關(guān)鍵酶,。它負責將纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,，形成血凝塊的基礎(chǔ)。

分子特性：牛凝血酶的分子特性符合高比活度酶的標準,，純度達到SDS-PAGE電泳無雜蛋白條帶的要求,。穩(wěn)定性：牛凝血酶在室溫下運輸穩(wěn)定，在2~8℃條件下可保存3年而酶活力未有變化,。應(yīng)用效果：在1:2000的質(zhì)量比下,，牛凝血酶能有效切割蛋白,，適用于科研和工業(yè)生產(chǎn)中的重組融合蛋白特異性斷裂。討論科研應(yīng)用：牛凝血酶因其高比活度和專一性,，在分子生物學,、生物化學和生物工程制藥研究中作為工具酶具有重要價值。臨床：作為止血藥物,，牛凝血酶在外科手術(shù)中的應(yīng)用超過100年,，因其簡便和高效而受到青睞6。生產(chǎn)優(yōu)勢：牛凝血酶的生產(chǎn)穩(wěn)定性好,，純度高,，不含有其他蛋白酶活性，適合大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用,。

生物醫(yī)學應(yīng)用止血和血栓形成研究牛纖維蛋白原用于研究以理解止血和血栓形成的機制,。它作為研究可溶性纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為不溶性纖維蛋白及其與血小板和其他凝血因子相互作用的模型。組織工程在組織工程領(lǐng)域,，由于纖維蛋白原能夠在凝固時形成穩(wěn)定的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),，因此被用來創(chuàng)建細胞生長的支架。這一特性使其成為傷口愈合和組織再生應(yīng)用的理想候選物,。藥物開發(fā)纖維蛋白原與各種藥物和化合物的相互作用是研究的一個課題,。例如，研究其與某些藥物的結(jié)合可以幫助我們理解藥物在分子水平上的運輸和代謝過程,，這對藥物開發(fā)至關(guān)重要,。診斷學纖維蛋白原還用于開發(fā)各種疾病的診斷試驗，其中纖維蛋白原的異常水平可以表明炎癥,、損傷或其他病理條件,。結(jié)論牛纖維蛋白原是一個多面的手分子，在研究和臨床應(yīng)用中具有重要作用,。它的結(jié)構(gòu)復(fù)雜性和功能性重要性使其成為持續(xù)研究的寶貴主題,。隨著提取和純化方法的不斷改進，其在醫(yī)學和生物技術(shù)領(lǐng)域的實用性也將不斷提高,。通過使用PNGase F去除糖蛋白上的糖鏈,，可以確定蛋白質(zhì)是否發(fā)生糖基化，以及糖基化位點,。

PreScissionProtease是一種由人鼻病毒14型的3C蛋白酶（humanrhinovirus(HRV)type143Cprotease）和GST組成的融合蛋白,。該蛋白酶可在低溫下（4°C）特異識別短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro，并在Gln和Gly氨基酸殘基之間進行酶切,。底物的識別和切割不僅依賴于融合蛋白的一級結(jié)構(gòu)還依賴于融合蛋白的二級和三級結(jié)構(gòu),。它可以特異性的將pGEX-6P系列等載體表達出的帶有酶底物識別多肽序列融合蛋白的GST標簽進行分離。本品由大腸桿菌中重組表達,，以無菌液體形式提供,。產(chǎn)品性質(zhì)中文別名（ChineseSynonym）重組Prescission蛋白酶英文別名（EnglishSynonym）3Cprotease,，Picornain3C，PSP來源（Source）大腸桿菌表達分子量（MolecularWeight）約46kDa物理外觀（PhysicalAppearance）無菌無色液體儲存緩沖液（StorageBuffer）25mMTris-HCl（pH8.0）,，150mMNaCl,，1mMEDTA，5mMDTT,，50%（V/V）Glycerinα-凝血酶不僅在凝血中起作用，還在細胞信號中發(fā)揮作用,。它可以啟動血小板并刺激炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生,。Recombinant Human Fc gamma RIIIA/CD16a (F176)(His-Avi Tag)

泛素蛋白（Ubiquitin，簡稱Ub）是一種在真核細胞中普遍存在的小分子蛋白,，具有高度保守性,。Recombinant Human BDCA-2 Protein,mFc Tag

IdeSProtease全稱免疫球蛋白G降解酶，酶活（Enzymeactivity）40U/μL酶活定義（UnitDefinition）在37℃條件下,，反應(yīng)30min,，剪切＞95%的1μg重組單克隆IgG所需要的酶量定義為一個活性單位。儲存條件-25~-15℃保存,，有效期1年,。使用方法1.在消化液中加入適量IgG(加至5mg)；2.在IgG樣本中加入IdeS蛋白酶（每1μgIgG加入1個單位的IdeS）,；3.將樣品置于37℃孵育30-60min,。IdeS蛋白酶在中性pH或接近中性pH的緩沖中活性強。推薦反應(yīng)緩沖是50mM磷酸鈉,，150mMNaCl（pH6.6）,，多數(shù)常見的生物緩沖也適用，比如Tris或PBS,；注意：不在此pH范圍（例如乙酸鹽緩沖液）的緩沖也可能適用,，但是孵育時間或酶量需要根據(jù)實際情況進行優(yōu)化。注意事項1.IdeS不能識別切割小鼠IgG1/IgG2b,大鼠,、豬,、牛和山羊IgG，對小鼠IgG2a和IgG3具有中等酶切活性,，酶切小鼠IgG2a和IgG3建議增加IdeS的用量（推薦用量為正常用量的5-10倍）,。2.IdeS不能切割非IgG亞型的單抗分子，包括IgA,、IgM,、IgD和IgE。Recombinant Human BDCA-2 Protein,mFc Tag