5'DNA腺苷?；噭┖械膯尾椒磻?yīng)是一種高效的酶促反應(yīng)，用于在DNA分子的5'端添加一個(gè)腺苷酸（AMP）基團(tuán),。這個(gè)過程通常涉及以下步驟：1.**準(zhǔn)備反應(yīng)混合物**：-根據(jù)試劑盒說明書,，將所需的5'磷酸化的單鏈DNA（ssDNA或pDNA）、MthRNA連接酶（或其他腺苷?；福?、ATP和相應(yīng)的緩沖液按比例混合。2.**孵育反應(yīng)**：-將混合好的反應(yīng)體系在指定的溫度（通常是65℃）下孵育一定的時(shí)間,，以允許酶將ATP中的AMP部分轉(zhuǎn)移到DNA的5'端,。3.**酶失活**：-反應(yīng)完成后，通常在85℃孵育5分鐘以失活腺苷?；?，這一步是為了防止后續(xù)的去腺苷酰化現(xiàn)象,，確保反應(yīng)的穩(wěn)定性,。4.**產(chǎn)物收集**：-由于轉(zhuǎn)化效率高，通常不需要進(jìn)行凝膠純化步驟,?？梢酝ㄟ^乙醇沉淀等方法收集腺苷酰化后的DNA產(chǎn)物,。5.**產(chǎn)物應(yīng)用**：-收集的腺苷?；疍NA可以直接用于后續(xù)的克隆、測序,、連接或其他分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),。6.**注意事項(xiàng)**：-確保所有操作在無RNA酶和無DNA酶的環(huán)境中進(jìn)行，以避免污染,。-使用時(shí)需注意反應(yīng)體系的準(zhǔn)確性,，確保底物、酶和ATP的比例適當(dāng),。單步反應(yīng)的優(yōu)勢在于簡化了操作流程,，減少了樣品處理的復(fù)雜性，并且由于高轉(zhuǎn)化效率,，避免了耗時(shí)的純化步驟,，從而節(jié)省了時(shí)間和成本。將合成的gRNA與Cas9 NLS蛋白混合,，形成復(fù)合物,。由于Cas9 NLS蛋白兩端都有NLS，有助于復(fù)合物快速進(jìn)入細(xì)胞核,。Recombinant Cynomolgus AGER Protein,His Tag

T4UvsX重組酶是一種來源于T4噬菌體的酶,，它是RecA/Rad51家族的同源體,。這種重組酶在雙鏈DNA斷裂的修復(fù)和復(fù)制叉重新啟動(dòng)的過程中起到重要作用。T4UvsX重組酶可以通過與其他DNA結(jié)合蛋白或輔助因子一起與單鏈DNA形成核酸蛋白復(fù)合物,，并通過尋找與靶標(biāo)DNA的互補(bǔ)區(qū)域進(jìn)行雜交,，以完成鏈置換反應(yīng)。此外,，T4UvsX重組酶在生產(chǎn)時(shí)由大腸桿菌表達(dá)和純化,。T4UvsX重組酶的產(chǎn)生過程涉及到基因工程和蛋白質(zhì)表達(dá)的常規(guī)技術(shù)。首先,，T4噬菌體的基因序列被識(shí)別并克隆到適合的表達(dá)載體中，然后這個(gè)載體被轉(zhuǎn)化到大腸桿菌宿主細(xì)胞中,。在宿主細(xì)胞內(nèi),，T4UvsX基因被轉(zhuǎn)錄和翻譯，產(chǎn)生重組酶蛋白,。隨后,，通過一系列步驟包括細(xì)胞培養(yǎng)、蛋白質(zhì)表達(dá),、細(xì)胞裂解,、蛋白質(zhì)純化等，獲得所需的T4UvsX重組酶,。這一過程通常在生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行,，并且需要精確的分子生物學(xué)操作和蛋白質(zhì)工程知識(shí)。

5'DNA腺苷酰化試劑盒的適用性非常廣,，主要包括以下幾個(gè)方面：1.**miRNA克隆**：該試劑盒可用于miRNA等3'端為羥基的RNA或單鏈DNA在克隆時(shí),，3'端添加接頭的制備。2.**高通量測序建庫**：在高通量測序中,，該試劑盒可用于制備5'端腺苷?；揎椀膯捂淒NA，這些DNA可以用于測序文庫的構(gòu)建,。3.**PCR檢測**：在PCR檢測中,，該試劑盒可以幫助制備具有特定5'端修飾的DNA片段，以適應(yīng)某些PCR應(yīng)用的需求,。4.**單鏈DNA或RNA的5'端腺苷?；?*：試劑盒可以催化5'端磷酸化的單鏈DNA或單鏈RNA轉(zhuǎn)換成5'端腺苷酰化DNA或RNA,，無論3'端是否進(jìn)行了氨基化等封閉,。5.**環(huán)狀DNA生成**：在不存在ATP的條件下,，5'DNA/RNAAdenylase可以催化5'端磷酸化的單鏈DNA生成環(huán)狀DNA。6.**RNALigation**：該試劑盒包含的MthRNA連接酶,，可以用于RNA的連接反應(yīng),，尤其是在需要5'端腺苷酰化DNA作為連接接頭時(shí),。7.**科研實(shí)驗(yàn)**：所有提到的產(chǎn)品信息都明確指出,，5'DNA腺苷酰化試劑盒用于科研實(shí)驗(yàn),，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,。

1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)通常提供幾種不同類型的引物用于啟動(dòng)cDNA的合成。這些引物包括：1.**Oligo(dT)引物**：這種引物通常與mRNA的poly(A)尾部互補(bǔ)配對,，適用于從真核生物的mRNA中合成cDNA,。它能夠產(chǎn)生大量全長cDNA，特別是當(dāng)模板來源于真核生物時(shí),。2.**隨機(jī)六聚體引物（RandomHexamers）**：這些引物是一組隨機(jī)的六核苷酸序列,，可以與RNA模板的任何部分結(jié)合，從而啟動(dòng)cDNA的合成,。它們適用于mRNA,、rRNA、tRNA和長非編碼RNA等多種類型的RNA模板,。3.**基因特異性引物（GeneSpecificPrimers）**：這些引物是針對特定基因序列設(shè)計(jì)的,，可以用于從總RNA或mRNA中合成特定基因的cDNA。它們通常用于當(dāng)需要選擇性地?cái)U(kuò)增特定基因或基因家族時(shí),。在選擇引物時(shí),，需要考慮RNA模板的來源、RNA的質(zhì)量和特性以及后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需求,。例如,，如果RNA模板具有復(fù)雜的二級結(jié)構(gòu)或較高的GC含量，可能需要使用隨機(jī)引物以提高cDNA合成的效率,。另外,，如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)是qPCR，可以將Oligo(dT)與隨機(jī)引物混合使用,，以提高qPCR結(jié)果的真實(shí)性和重復(fù)性,。FnCas12a特異性識(shí)別并剪切帶PAM序列的雙鏈DNA（dsDNA）靶標(biāo)，其PAM序列為5'-TTN-3',，與Cas9的PAM序列不同,。

核酸（DNA和RNA）的可視化是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的一項(xiàng)基本技術(shù)，用于檢測和分析核酸的存在、大小,、數(shù)量和純度,。以下是幾種常用的核酸可視化方法：1.**紫外線（UV）檢測**：-利用核酸分子對UV光的吸收特性，特別是在260nm波長下的吸收峰,。-常用的UV檢測方法包括凝膠電泳后的凝膠成像系統(tǒng),，可以觀察到凝膠中DNA或RNA的條帶。2.**熒光染料染色**：-使用熒光染料,，如溴化乙錠（EthidiumBromide,EB）或SYBRGreen,，這些染料可以與核酸結(jié)合并在特定波長的光照射下發(fā)出熒光。-EB常用于凝膠電泳后的DNA可視化,，而SYBRGreen可用于實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）中DNA的檢測,。3.**凝膠電泳**：-通過將核酸樣品加載到凝膠中，利用電場驅(qū)動(dòng)核酸分子按大小分離,，然后通過上述的UV或熒光染料進(jìn)行可視化,。4.**紫外交聯(lián)**：-某些熒光染料，如BODIPY或Cy5,，可以通過紫外交聯(lián)直接結(jié)合到核酸上，提供更高的靈敏度和特異性,。5.**銀染**：-一種比EB染色更靈敏的染色方法,，通過銀離子與核酸的結(jié)合，然后還原成金屬銀,，形成可見的黑色或棕色條帶,。6.**化學(xué)發(fā)光檢測**：-使用特定的化學(xué)發(fā)光底物，如熒光素或魯米諾,，與核酸結(jié)合后,，在氧化過程中產(chǎn)生光信號(hào)。將含有重組質(zhì)粒的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞中,，通常是大腸桿菌或其他合適的細(xì)胞系,。Recombinant Human B7-H3(4Ig)/B7-H3b (hFc Tag)

在MAGE-A3基因序列的C末端添加His標(biāo)簽和Avi標(biāo)簽序列。His標(biāo)簽有助于通過金屬螯合親和層析進(jìn)行蛋白純化,。Recombinant Cynomolgus AGER Protein,His Tag

pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過改造的高活性Tn5轉(zhuǎn)座酶,，與ProteinA融合，形成一種新型融合酶,，應(yīng)用于CUT&Tag技術(shù)中,，用于研究蛋白質(zhì)與基因組DNA的相互作用。這種融合酶具備以下特點(diǎn)：1.**高活性**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是超高活性的突變形式,，體外轉(zhuǎn)座效率比野生型高1000倍,。2.**ProteinA融合**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的N端結(jié)構(gòu)域?yàn)镻roteinA的一部分，可以與免疫球蛋白的Fc區(qū)相互作用，特別是與大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG結(jié)合,。3.**Tn5轉(zhuǎn)座酶活性**：C端結(jié)構(gòu)域?yàn)門n5轉(zhuǎn)座酶,，能夠特異性識(shí)別轉(zhuǎn)座子兩端反向重復(fù)的ME序列(MosaicEnd)，并在形成轉(zhuǎn)座復(fù)合體后隨機(jī)插入靶DNA中,。4.**應(yīng)用廣**：適用于CUT&Tag技術(shù),、高通量測序建庫、ATAC-seq等,，特別適用于早期胚胎發(fā)育,、干細(xì)胞、以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域,。5.**操作簡便**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用簡化了實(shí)驗(yàn)步驟,，可以在一步反應(yīng)中實(shí)現(xiàn)DNA片段化和接頭連接，從細(xì)胞到二代測序文庫的轉(zhuǎn)化過程需9小時(shí),。6.**低細(xì)胞投入量**：CUT&Tag技術(shù)允許從低至60個(gè)細(xì)胞的樣本中獲得結(jié)果,，甚至可以應(yīng)用于單細(xì)胞水平的研究。7.**高質(zhì)量結(jié)果**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用可以保證DNA片段化,，同時(shí)獲得的蛋白純度高,、核酸殘留低。Recombinant Cynomolgus AGER Protein,His Tag